PCR产物纯化后,连接载体PGMT,转化如DH5α后为何不能直接测序,还要再酶切和提取质粒呢?

如果PCR产物可以直接用来测序,但为什么还需要买PCR产物纯化试剂盒,还要进行连接转化提质粒酶切? 为什么我的目的基因连接克隆载体转化、提质粒后,酶切鉴定正确,而质粒PCR和菌液PCR鉴定都不正确呢?着急 菌液PCR不同条带将已扩增出来的993bp的cDNA与T载体连接,之后DH5α转化,涂平板,挑克隆!菌液PCR为何一组检 用同种限制酶切质粒和含有目的基因的DNA,用DNA连接酶连接后为什么不会出现载体-目的基因连接物这种产物? 为什么pcr扩增后不直接进入表达载体,而要经过克隆载体呢?关键原因是什么呢? pcr产物不纯化直接酶切连接可以吗?PCR反应的buffer会不会对酶产生影响哦~ RT-PCR出一段目的基因,为什么要把它先TA克隆呢?为什么不能直接把它连接到相应的质粒上呢 质粒转化农杆菌感受态后,挑斑摇菌菌液PCR后无条带. PCR产物直接测序的原理 我构建的穿梭载体,连接好后进行双酶切和PCR两个途径的检测,结果酶切没有条带显示,而PCR确有目的条带! T 载体与 目的基因连接成功,测序结果也正确.从新摇菌,提取质粒,在进行双酶切,一直切不下来. 平时高压直流输电的时候,为什么把交流转化成直流后,还要把直流再转化为交流呢?直流不能直接