PCR产物和质粒双酶切后电泳如何判断酶切完成?

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：生物作业时间：2024/05/28 02:21:12

你是不是要把双酶切后的质粒与载体连接,而无论是PCR还是载体都无法通过电泳判断是否酶切完全,所以不好进行连接呀?对于PCR产物一般会采取这样的策略,将产物首先连接到T载体上,然后再用设计好的双酶切,电泳回收切下的条带,这样就能确保得到的是完全酶切的产物.载体判断比较麻烦,要看载体本身、多大双酶切为点之间的条带有多大、双切前后的大小是否能通过电泳区别出来,但是双切位点一般都在标记基因里面,所以插入片段的载体会在后期转化可以后区分开,所以也没有太大必要确定他是否完全,只要充分酶切就好了.
再问： PCR产物连接到T载体上是不是不用经过酶切就直接连接
再答：对的，不用酶切，直接连接T载体，送去测序证明得到的片段没有碱基突变之后再酶切克隆到相应的载体上去，这是最有保证的做法

如何验证载体质粒的酶切位点已被切开?PCR产物（目的基因）被酶切开? PCR产物的电泳条带不够亮,为何?如何优化PCR反应体系如果PCR产物可以直接用来测序,但为什么还需要买PCR产物纯化试剂盒,还要进行连接转化提质粒酶切? 为什么我的目的基因连接克隆载体转化、提质粒后,酶切鉴定正确,而质粒PCR和菌液PCR鉴定都不正确呢?着急 PCR产物酶切遇到的问题 PCR后的质粒DNA电泳的泳道上有一长段白色印迹胶回收：雀式pcr第一对pcr引物扩增后 ,产物电泳得到两条带,那么我该切哪一条啊? PCR产物电泳做胶回收不也得到纯化的目的?PCR产物纯化试剂盒的好处是什么? 请帮忙分析这个质粒DNA酶切的电泳图跪求高手指点一下,为什么我的PCR产物电泳图这个样子.引物是通用引物27F和1492r体系25ul,buffer：2.5 请问原位RT-PCR产物如何定量? 半定量RT-PCR电泳图如何分析