是做基因克隆还是pcr产物直接测序?

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：综合作业时间：2024/05/23 22:06:28

是做基因克隆还是pcr产物直接测序?
我从某植物转录组测序结果中找到一个基因序列,结果预测是有完整ORF的,但我在orf两侧设计引物pcr产物直接测序,多次测序的结果在orf两端的序列都不同,orf是从99bp-1700bp,pcr测序结果在216bp之后的序列是多次pcr产物测序结果一致并且与转录组测序结果也一致,是包含polyA结构的.又已经设计了从1bp-500bp的引物企图扩增,但未得到产物.现在是在考虑要不要做5‘端race克隆得到包括ATG的99-216bp处的序列或者别的什么快速简单的方法能得到完整orf?是来做硕士毕业论文

看来你的植物材料没有基因组数据啊,这样的话5’-RACE是必需的,两头序列有了以后,直接设计引物从基因组DNA扩增以及从cDNA中扩增,找到内含子

PCR产物直接测序的原理刚刚学做克隆,看到网上有两种平末端DNA加A尾方法,一种是切胶回收后加,另一种是直接加在PCR产物中,想请问： PCR片段直接测序和PCR片段经克隆后测序的结果有何区别? PCR产物测序问题用PCR产物直接测序,PCR产物是1200bp左右,但是测出来只有1000bp,请问为什么少了这么多序 PCR扩增抗除草剂基因为什么是克隆? 从NCBI上查找到的一个目的基因做PCR,设计引物时PCR产物长度是这个基因的全部序列吗? 基因工程得到目的基因,反转录+pcr后用电泳检测,到底能检测出什么?电泳检测后就直接可以做克隆载体dna? 基因克隆实验克隆实验问题 1、以cDNA为模板做PCR反应,得到的产物和预期的长度一样.2、再用pMD-19载体连接目的 PCR产物可以直接测序吗关于PCR克隆基因的引物问题如果PCR产物可以直接用来测序,但为什么还需要买PCR产物纯化试剂盒,还要进行连接转化提质粒酶切? PCR克隆出来的基因怎么确定是我想要的