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克隆后测序后序列问题我对一株细菌进行PCR后纯化再做克隆,平板上都是白斑,就随机挑出几个培养测序,我是本科生,这个都不懂

来源:学生作业帮 编辑:作业帮 分类:综合作业 时间:2024/05/22 12:06:20
克隆后测序后序列问题
我对一株细菌进行PCR后纯化再做克隆,平板上都是白斑,就随机挑出几个培养测序,我是本科生,这个都不懂,测得的结果是由师兄帮我分析的,他通过拼接得到一段序列只有7百多,在NCBI上比对说相似度0%,结果我十分怀疑,请各位大侠帮助啊
挑出几个菌落直接培养测序是不适当的.菌落中有很大一部分比例转进去的是空载体,没有成功连入目的基因片段.所以要多挑一些单菌落,培养后用菌液PCR或者提质粒后双酶切鉴定是否连入目的基因,选择成功连入目的基因(阳性克隆)的再拿去测序.你现在的测序结果,很有可能只是载体本身的序列.