为什么酶切实验要求加样迅速,要在冰上进行操作?

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：生物作业时间：2024/05/26 13:49:48

连接前最好将水、插入片段和载体混合好以后置于45度水浴5min,马上置于冰上冷却,再加入buffer和ligase.
双酶切时间及其体系：需要强调的是很多人建议酶切过夜,其实完全没有必要,我一般酶切3个小时,其实1个小时已经足够.应用大体系,如100微升.
纯化问题：纯化PCR产物割胶还是柱式,我推荐柱式,因为割胶手法不准,很容易割下大块的胶,影响纯化效率.现在的柱式纯化号称可以祛除引物,既然如此,酶切掉的几个碱基肯定也会被纯化掉了.所以,PCR产物和双酶切产物的纯化均可应用柱式纯化.我用的是TAKARA的纯化柱试剂盒
酶量的问题：以TAKARA的为例,其对1单位酶的定义如下：在50 μl 反应液中,30℃温度下反应1小时,将1 μg 的λDNA完全分解的酶量定义为1个活性单位(U).而该酶浓度约为15单位/微升,在除外酶降解的因素外,该酶可分解15μg的DNA,而一般从1-4ml菌液提出的 DNA约为3μg,而PCR纯化后的产物（50体系）约为3μg,所以即便全部加进去,只要纯化的质量好,酶切完全切得动.

为什么酶切实验要求加样迅速,要在冰上进行操作? PCR为什么要在冰上操作? 大肠杆菌感受态制备为什么要冰上操作,0-4℃操作.还有,为什么要采用对数生长期的菌? 为什么在冰上撒盐冰就化了为什么盐加在冰上温度会更低而加在雪上则会使雪融化? 在发酵生产中,为什么要进行灭菌操作? 在进行倒母线操作时,为什么要先取下母联开关的操作保险? 在我国现价段为什么要在经济发展中强调调整产业结构,切实转变经济发展方式? 在我国现阶段为什么要在经济发展中强调调整产业结构,切实转变经济发展方式? 把盐放在冰上面为什么会使冰温度降低? 为什么在冰上撒盐能加快冰的熔化盐撒在冰上为什么冰的温度会降低?