作业帮Affinity pull down assay (DAPA)的实验原理?
来源：学生作业帮 编辑：作业帮 分类：政治作业 时间：2024/05/22 02:56:40
Affinity pull down assay (DAPA)的实验原理?
我正在看的文献里方法上是这样说的，先设计DNA probe，然后获得一个400bp的probe，再hybridized to 链霉亲和素--coated magnetic beads。
再把这个跟细胞核提取物孵育，然后The probes were then immobilized on a magnetic stand,and unbound proteins were removed。
谁能简单介绍下原理
我正在看的文献里方法上是这样说的，先设计DNA probe，然后获得一个400bp的probe，再hybridized to 链霉亲和素--coated magnetic beads。
再把这个跟细胞核提取物孵育，然后The probes were then immobilized on a magnetic stand,and unbound proteins were removed。
谁能简单介绍下原理
你基本都说出来了.
DNA probe 和链霉亲和素杂交在一起,而链霉亲和素能够和magnetic beads亲和结合,所以经过孵育之后,再将细胞核提取物流过beads,DNA probe是400bp的,所以和目的DNA结合力相当高,就将目的DNA留在beads里面,其他不能结合的就都被去除.最后,在用专门的洗脱液（对应于链霉亲和素）进行洗脱,得到目的DNA.
你可以看看 GST-tag ,his- tag,等等pull down assay 的实验原理,虽然这些是针对蛋白的,但是原理一样,很简单的,记得做好control就行了.
再问： 可是这篇文章里说的，最后是用westernblot检测的蛋白啊，不是得到目的DNA吧？
再答： 你没有弄懂，洗脱后留下的ＤＮＡ还是和链霉亲和素结合在一起，洗脱液只是把它从ｂｅａｄｓ中洗脱下来。而ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ是用来检测链霉亲和素蛋白，而它不是又和ＤＮＡ在一起么，所以间接检测的是ＤＮＡ。否则你怎么检测目的ＤＮＡ，再设计一次ｐｒｏｂｅ？显然不是，设计这种加特殊蛋白ｔａｇ的ＤＮＡ ｐｒｏｂｅ意义就在于方便检测。
DNA probe 和链霉亲和素杂交在一起,而链霉亲和素能够和magnetic beads亲和结合,所以经过孵育之后,再将细胞核提取物流过beads,DNA probe是400bp的,所以和目的DNA结合力相当高,就将目的DNA留在beads里面,其他不能结合的就都被去除.最后,在用专门的洗脱液（对应于链霉亲和素）进行洗脱,得到目的DNA.
你可以看看 GST-tag ,his- tag,等等pull down assay 的实验原理,虽然这些是针对蛋白的,但是原理一样,很简单的,记得做好control就行了.
再问： 可是这篇文章里说的，最后是用westernblot检测的蛋白啊，不是得到目的DNA吧？
再答： 你没有弄懂，洗脱后留下的ＤＮＡ还是和链霉亲和素结合在一起，洗脱液只是把它从ｂｅａｄｓ中洗脱下来。而ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ是用来检测链霉亲和素蛋白，而它不是又和ＤＮＡ在一起么，所以间接检测的是ＤＮＡ。否则你怎么检测目的ＤＮＡ，再设计一次ｐｒｏｂｅ？显然不是，设计这种加特殊蛋白ｔａｇ的ＤＮＡ ｐｒｏｂｅ意义就在于方便检测。
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