作业帮实时荧光定量PCR后反应体系出现蒸发,用的是ABI 7500
来源：学生作业帮 编辑：作业帮 分类：综合作业 时间：2024/05/18 02:05:53
实时荧光定量PCR后反应体系出现蒸发,用的是ABI 7500
我做实时荧光定量PCR,有两个问题要解决：
1.PCR之后发现反应体系减少了,可能是因为蒸发了,但是我在PCR之前使劲盖紧盖子了,为什么还会减少.
2.PCR反应体系有气泡,对PCR的结果影响大吗
我做实时荧光定量PCR,有两个问题要解决：
1.PCR之后发现反应体系减少了,可能是因为蒸发了,但是我在PCR之前使劲盖紧盖子了,为什么还会减少.
2.PCR反应体系有气泡,对PCR的结果影响大吗
你盖紧了盖子不等于就盖紧了PCR管.可能你用的是国产的PCR管吧.通常国产的质量稍差,本身就是密封不严的.也就是说PCR管口不够严密,盖上PCR管子的盖,也不能完全密封.这样即使你怎么使劲盖,也没有用.要解决蒸发的问题,有两个办法,一个是用进口管,可以有效的减少蒸发,但如果你体系做得太小,比如5微升,那么蒸发可能还是比较明显.另一个办法就是还用你原来的PCR管子,但是把体系加大!比如你原来做15微升,现在改到做30微升,保证即使蒸发了也能够你用!
PCR反应有气泡很可能是因为你把PCR管放入PCR仪之前没有离心!通常我们会瞬离一下,把气泡离掉!PCR反应是不可能产生气泡的,因为只是简单的加热,降温的变化,没有达到沸腾.如果有气泡的话得看你的体系有多大,如果太小,是会有影响的.另外你可以在设置PCR程序是稍微把体系设置大一点,比如你做30微升体系,你就设置成40微升.
希望我的回答能令你满意.
PCR反应有气泡很可能是因为你把PCR管放入PCR仪之前没有离心!通常我们会瞬离一下,把气泡离掉!PCR反应是不可能产生气泡的,因为只是简单的加热,降温的变化,没有达到沸腾.如果有气泡的话得看你的体系有多大,如果太小,是会有影响的.另外你可以在设置PCR程序是稍微把体系设置大一点,比如你做30微升体系,你就设置成40微升.
希望我的回答能令你满意.