作业帮考马斯亮蓝染色法测固定化酶载酶量
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/06/03 05:35:28
可能原因：蛋白上样量太少,蛋白转过去了,蛋白还没转到膜上去,丽春红灵敏度不够.你的蛋白是单一蛋白还是总蛋白?如果是总蛋白,而且上在同一道上,那就没必要做后面的了.很可能是转膜失败.
应为不知道你的标准曲线Y的单位,如果是以加入的标准品的质量做出的曲线,同时没有什么稀释过程的话,你就直接算好了：Y=0.0044*68.790+0.0245=0.327176（单位）,总蛋白量=0.3
工作量大了点吧!自己看看参考资料吧!很全
是电泳结束后,把分离胶切下来放在平皿里,用考马斯亮蓝染液（0.05%）染色过夜,之后换脱色液（醋酸：乙醇：水1：4：5）泡一段时间就能看到清晰的条带了~
蛋白质所测的OD值一定要位于标准曲线范围内,因为G-250的曲线随着蛋白浓度增高有些略微偏离线性,若蛋白质浓度太高,可适当稀释后再测.此外,用于标准样品的牛血清白蛋白组分V最好现配现用,已经配好的溶液
染太久后背景太重,不容易脱色,也就不容易看到条带
会的.不仅碱性氨基酸,去垢剂,如SDS,还有高浓度的缓冲液都会有影响.而且由于蛋白质酸性,碱性氨基酸含量不同,即使蛋白质浓度相同,所测出的值也会不同.
可溶性蛋白质含量的测定——考马斯亮蓝法一、原理考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量属于染料结合法的一种.考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色,最大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色,蛋白质
将100mg考马斯亮蓝G-250溶于50m195％乙醇,加入100ml浓磷酸,然后,用蒸馏水补充至200ml,此染液放4℃至少6个月保持稳定.—————————————————————————————
考马斯亮蓝G-250（CoomassiebrilliantblueG-250）测定蛋白质含量属于染料结合法的一种.考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色,最大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为
Folin酚法最好,准确度最高；双缩脲法最差,准确度最低；现很少用；考马斯亮蓝G250法介于两者之间.
有问题的地方基本排除了我只能想出一个问题就是要加强操作别的我也不知道了
降低染色液浓度,缩短染色时间.考染太过,会使得所有蛋白质表面都包着厚厚的一层染料,无法定量.只有降低染色液浓度,缩短染色时间才能使得染色回到线性区域,让染料强度和蛋白质浓度成正比.
1.分光光度计预热下会准些2.是否调0\100,3.用紫外的试试看楼主可曾换一台分光光度计试试,有些仪器时间长了不准的
你这个有可能是1脱色不全建议再脱色一会2如果跑的是总蛋白的话,有可能会出现连续的蓝色条带.3蓝白相间的竖条纹?我猜这是横条纹吧……再问：是竖条纹，不是横着的条带。还有有时样品前沿跑不到一条线上，怎么回
WB的胶用考马斯亮蓝染色,有为了确定你的目的条带电泳情况目的,还有一个目的,就是跟用丽春红染摸一样的作用,看转膜的效率.也就是看你的目的条带是否都转移到你的膜上了.这步染色完全可以省略,一般都可以用预
我做过这个,R=0.9986,测蛋白就是用这个方法.你可以找国标嘛,步骤都很详细.
是液体就好测了呀把样品取出1ml,按照做标准曲线时一样的处理,再测OD值就行了
上样太多了,每孔里面没必要上那么多样品,你上样之前应该定下蛋白或是用Nanodrop测下蛋白浓度
不用固定,染色液中乙酸就有固定的作用,染色液配方：甲醇：水：乙酸=4.5:4.5:1或5:4:1再问：请问，AC固定是起什么作用的？谢谢。。。再问：请问，AC固定是起什么作用的？谢谢。。。