用上下游两个引物怎样能够专一的复制出目的基因的特定序列

根据河流不同河段的水文信息进行划分,根据流量、流速、比降、落差、泥沙含量、河流季节变化、水补给等因素进行划分.根据流域内不同河段的地形、地势等因素进行划分.\x0d一般来说,将河流大致分成三等段,河流

可以这样来说吧,首先你应该有一条已知的序列,反向引物设计时在序列的5'方向找一段序列然后反向互补作为反向引物,在3'方向直接找一段序列作为正向引物.这样就OK了,这是引物的设计,至于其他条件可以参考相

你理解的没错.上下游引物同时用才能特异性扩增中间的那部分片段.

至死不移

FPrimer:5'-TTGTAAAAAAATTAAATTAA-3'RPrimer:5'-CATATTTTAATTAATATTTC-3'你这个序列AT含量太高,尤其是5'端A有7个连续重复,引物本身很

上游：5ggaattcatgtttagtttgaaaaaaac3下游：5gggttcgaattagacattgccaacatatt3你要的并不是鉴定引物,而是扩增引物根本不用软件

引物设计原则：1、长度：15—30bp,其有效长度[Ln=2(G十C)十(A十T)]一般不大于38,否则PCR的最适延伸温度会超过Taq酶的最佳作用温度(74度),从而降低产物的特异性.2、G十c含量

为了形象,不写ATCG,换个比较容易看懂的形式模板是：abcd123.456efgh上游引物是：987ABCD123下游引物是：456EFGH789（这里为了方便观察下游印务给出了3’-5‘形式,通常

要先在http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed网址查询有关序列,再在PrimerPremier5软件中进行引物设计,主要要注意以下几个方面：①引物长度一般引物长度为18~3

PCR引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段,使其能有效地扩增模板DNA序列.因此,引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否.要设计引物首先要找到DNA序列的保守区.同时应预测将要扩增的片段

个人推荐使用PrimerPremier5

上游引物：GAATTCacgcgcaagattagg（后面可以继续加几个碱基,用PRIMER5.0看一下,引物设计多少个碱基合适,每个基因序列不同.我用TOYOBO的KODPLUS的话,就一般引物设计

不能,扩增酶扩增一定长度后会脱落,但你引物的互补链没有扩增,无法呈指数扩增,30个循环后只是扩增30倍根本没产物

NCBI上面得到的是mRNA序列可以用oligodt反转录,也可以用与mRNA互补的特异引物来反转录再问：恩，特异性引物有一对，上游和下游，老师问我用上游还是下游，望回答具体点再答：反转录当然是下游了

PCR反应第一步DNA双链变性逐步打开,第二部退火时两个引物各自与其互补链的5‘端通过碱基互补结合,并在第三步延伸反应时在引物的3’端不断加上新的碱基从而不断向前延长.每个引物的作用都一样.用上上下游

不用考虑.打分高即可.

[color=red][/color]4.28送菌液去某公司测序,昨天收到的测序报告连上下油的引物都找不到.后来我又做了菌落PCR（设阳性,阴性对照）有目的条带.请问各位是什么原因啊?测序结果上不会有

引物有一条和模版的序列相同,而另一条和模版的序列反向互补,上游和下游是自己定的,分别位于模版的两端

这个问题很简单,扩增序列应该称为目的基因,目的基因一般都上万bp,从两头开始当然不合适.PCR扩增只能扩增出上下游引物之间的序列,因为只有引物之间的DNA双链是解链状态的.你的问题说明你对基础知识掌握

一般认为Tm-5度.但是要看你的Tm计算方法,不同公司合成的引物得出的Tm都不一样,你可以做个梯度PCR看看最适退火温度,以后就有经验了.