作业帮如何设计巢氏PCR引物?
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/05/16 06:22:48
Oligodt不需要设计,用试剂盒里面的就行.如果你RT的引物想用自己的,那你需要扩增的基因序列应该是明确的吧.RT的时候'引物没太多的选择性,mRNA序列跟反义链配对,因此RT的引物要根据正义链（就
完全可以,PCR长度从50bp到数百都可以,不止局限于150-300个碱基对.楼上说的有道理,但是有一点要注意,最好计算一下扩增片段的Tm值,这样做溶解曲线的时候,光有一个峰还不够,而且得到的TM和你
你查到人类和小鼠该基因对应的mRNA序列,进行比对,找出高度同源的一段,下面就是常规的real-timePCR引物设计步骤了,你知道的吧?
用PP5.0或oligo软件.网上有很多说明书的,操作十分简单再问：等于白说
引物可以通过一些软件设计,比如primer5,但是还需要注意一些细节问题.比如1.引物最好在模板cDNA的保守区内设计.DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的.在NCBI上搜索不同物种的同
如果你测定的基因序列未知,可以用同源基因或者别的物种的同类基因序列来设计引物,进行PCR,看看是否能够扩增出产物,并对产物进行确认,判断扩增的特异性.如果确认无误,就可以进行荧光定量PCR.再问：我想
ATCG.原理就是体外环境模仿人体内环境,完成人体内的DNA复制,大概就这样.
若是根据已知序列扩增未知物种的相应序列,可以根据先根据已知序列进行Blast搜索,发现其他同源序列,保存后进行比对,找出其中较保守区域,并根据Primer或Oligo等软件对某条序列进行分析,搜索其中
PCR引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段,使其能有效地扩增模板DNA序列.因此,引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否.要设计引物首先要找到DNA序列的保守区.同时应预测将要扩增的片段
一般要20个碱基的长度,一对,要防止形成发夹.
用primerpremie
一、可以使用oligo6或者primer5等软件设计.用这些软件选择引物,主要就是看引物的稳定性,形成二聚体的可能性,退火温度等等参数.二、如果你的序列同源性不高,GC含量也还可以的话,可以使用一些经
NCBI有免费的设计软件非常好用,权威把你的序列贴到最上方的空格就可以了,开始的时候,所有的参数都用系统的默认值就可以,不需要修改.
跟一般的PCR一样哇,PrimerPremier、Oligo都可以哦.
个人推荐使用PrimerPremier5
第一次的引物再用,效果不好,酶需要一些额外片段来结合在模板上,所以第二对引物要靠里.引物不同,能增加特异性,这也是巢式PCR的意义所在啦.看到图片会更好理解哈:hand:
普通PCR规则：1、18-25bp；2、Tm值在45-60；3、2个引物之间没有超过5bp的互补序列；4、CG%在40-60%；5、避免连续出现3个以上的CCC或GGG；6、不要迷信百度.
PCR扩增引物要在目的片段两测150bp位置为宜,这样设计的原因是既可以有效控制扩增产物的大小,因为太长的片读一个测序反应无法得到全场序列,又可以给测序设计内引物留出足够的空间.由PCR特性决定的,不
不要怕软件评分只管去做就是了只要重叠的部分足够就能做出来实在不行就先做一次然后回收目的条带为模板再做一次再问：我的目的条带是1000多个bp，跑胶出来的结果才750bp左右，然后我就不知道怎么办了……
可以使用primer5或者primerdesign设计还是主要考虑发夹结构,GC含量,Tm值和引物交叉,还有减少引物二聚体的产生.如果是扩增启动子的话,建议选择引物的长度30-35bp,一般试剂盒里有