在做PCR时,出现引物二聚体

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：生物作业时间：2024/05/15 12:29:28

在做PCR时,出现引物二聚体
做PCR的时候用的水作对照,不管是样品还是对照组都出现了引物二聚体,而且别的组的同学就没有此现象说明引物设计上和PCR反应条件上没有问题那么问题出在哪里呢?

一.引物设计和样品使用均是一样的情况,就是反应条件的问题
二.反应条件就看你的实验操作和所使用的仪器,操作都一样的话,仪器设定上出问题的可能性会大一些,其中退货温度是比较关键的
三.人品问题也会导致这样的情况
四.一般减少引物二聚体的方法：
1.从引物自身着手,重新设计引物,这是最根本解决这一问题的办法；
2.可能模板有问题；
3.模板浓度过小,适当加大模板量；
4.Taq酶,引物,Mg2+浓度可能过高,可降低它们的浓度；
5.取你所要加的上下游引物混合后,在100摄氏度下的沸水中煮5分钟,然后迅速拿出至于冰块之上瞬时冷却,这时再加入反应体系当中,引物二聚体就会消失的；
6.所配MIX中加5%的甘油或者5%的DMSO,可以增强特异性；
7.PCR反应体系的配制在冰上进行,最后加TAq酶,PCR结束后,产物勿放置在室温下过长时间,有人认为室温下有些TAQ酶会将多余的引物合成为二聚体；
8.增加循环数；
9.降低退火温度后有条带,则应逐渐提高温度,若提高温度的同时产物量减少,则考虑增加镁离子浓度（根据扩增片断长度而定,片段长则相应镁离子浓度应该高一些）；
10.若降低退火温度,发现还是只有引物二聚体,而且镁离子的浓度在 20-25mmol/l没有区别,则考虑Buffer等试剂没有完全融解、混匀,导致吸取的试剂浓度不对；
11.以上次的PCR产物作模板二次PCR,可以提高引物与模板的特异性,减少引物二聚体,如果两次时间间隔短的话,可以把原产物稀释100－1000倍,如果间隔较长可以稀释50－100倍.

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