作业帮sds聚丙烯酰胺凝胶电泳跑不到胶下部
来源：学生作业帮 编辑：作业帮 分类：综合作业 时间：2024/05/18 01:03:07
sds聚丙烯酰胺凝胶电泳跑不到胶下部
我这边用sds聚丙烯酰胺凝胶电泳老是跑不到下面,样品和marker都是只能跑到上面部分的条带,可我要的条带在比较靠下的位置,前面只有一次跑出来了,后面重复做都不怎么成功,有什么注意点或者改进方法么?
我这边用sds聚丙烯酰胺凝胶电泳老是跑不到下面,样品和marker都是只能跑到上面部分的条带,可我要的条带在比较靠下的位置,前面只有一次跑出来了,后面重复做都不怎么成功,有什么注意点或者改进方法么?
我们经常做这个,是比较基础的东西,
你的问题叙述的不是很明确,蛋白多大,用的什么MARKER,跑胶时间,电压,胶浓度是多少都没有交代,而且也没有胶图,仅提几点建议:
1.看你的问题,应该是胶浓度太低了,所以是高分子量蛋白分出来,低分子量还没来得及分开胶就已经跑到头,跑出去了.去查查多少浓度的胶适合分多少KD的蛋白,把胶的浓度调高点,比如说15%或者12%
2.介于你说你有一次跑出来了?你没有上图,我不能肯定你的试验结果,如果你确定浓度真的没问题,怀疑一下你的试剂是否出问题了.有可能是试剂有问题造成的交联不上,导致胶孔过稀,本质上和浓度太低一个道理.当然也有可能是电泳缓冲液的问题.(另外楼主你不会是漏液所以不往下跑吧~
3.看楼主应该是个新手(随便猜的咯:)),说一些配胶的经验吧.
第一.AP的质量要好,我们对比过一些国产的AP和进口的AP效果,明显进口的好用,胶凝的快,质量也高.
第二,胶凝了后不要急着用,也不要急着放四度,给他充分的时间交联,大约4-6个小时吧.就放室温,不要放37度.
第三,有些新手为了省时间,往往过量的加AP,这样交联效果会下降.
第四,浓缩胶一定要足够,跑出来的条带才好看
第五,液一定要混匀再倒胶
不知道楼主是自配的液体还是买的现成的试剂盒?如果是前者,其实这东西很基础,也不贵,还是买试剂盒的吧,质量有保证的.有一些国内的公司就很不错.
你的问题叙述的不是很明确,蛋白多大,用的什么MARKER,跑胶时间,电压,胶浓度是多少都没有交代,而且也没有胶图,仅提几点建议:
1.看你的问题,应该是胶浓度太低了,所以是高分子量蛋白分出来,低分子量还没来得及分开胶就已经跑到头,跑出去了.去查查多少浓度的胶适合分多少KD的蛋白,把胶的浓度调高点,比如说15%或者12%
2.介于你说你有一次跑出来了?你没有上图,我不能肯定你的试验结果,如果你确定浓度真的没问题,怀疑一下你的试剂是否出问题了.有可能是试剂有问题造成的交联不上,导致胶孔过稀,本质上和浓度太低一个道理.当然也有可能是电泳缓冲液的问题.(另外楼主你不会是漏液所以不往下跑吧~
3.看楼主应该是个新手(随便猜的咯:)),说一些配胶的经验吧.
第一.AP的质量要好,我们对比过一些国产的AP和进口的AP效果,明显进口的好用,胶凝的快,质量也高.
第二,胶凝了后不要急着用,也不要急着放四度,给他充分的时间交联,大约4-6个小时吧.就放室温,不要放37度.
第三,有些新手为了省时间,往往过量的加AP,这样交联效果会下降.
第四,浓缩胶一定要足够,跑出来的条带才好看
第五,液一定要混匀再倒胶
不知道楼主是自配的液体还是买的现成的试剂盒?如果是前者,其实这东西很基础,也不贵,还是买试剂盒的吧,质量有保证的.有一些国内的公司就很不错.
sds聚丙烯酰胺凝胶电泳跑不到胶下部
sds 聚丙烯酰胺凝胶电泳浓缩胶凝的太快 怎么办?
聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理以及SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理
SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳不出带的原因
SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳是分子量大的跑的快还是分子量小的快
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳与聚丙烯酰胺凝胶电泳原理上有何不同?
在SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳中,sds,sds-page,AB,AP,TEMED分别起什么作用?
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质的实验中.当加完分离胶后,为何要在其上加一层水?
在用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质分子量时,应注意哪些问题?
SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量是会产生误差的原因
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 实验后 有样品带 却没有MARKER带 是什么原因造成的?
为什么SDS-PAGE的电极缓冲液浓度较聚丙烯酰胺垂直板凝胶电泳的浓度高?