蛋白析出问题我的是HIS标签蛋白,超声裂解菌体后12000离心,SDS-PAGE检测目的蛋白大量存在于上清,于是按可溶性

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：生物作业时间：2024/05/05 13:38:18

蛋白析出问题
我的是HIS标签蛋白,超声裂解菌体后12000离心,SDS-PAGE检测目的蛋白大量存在于上清,于是按可溶性蛋白镍柱纯化,纯化出以后室温放置一段时间或是放于-20拿出后蛋白析出,而且一直溶解不回去.后来,将沉淀蛋白用8mol尿素溶解也不行.
应该不会是浓度过大的问题，可能因为析出，考马斯亮蓝测剩余溶液蛋白浓度很低。

看起来是构象不正确,可能是折叠或修饰的问题.如果只要求可溶,纯化后稀释一下,也许就不沉淀了.也可以试试加一些稳定剂,如甘油,DTT,分子伴侣等.
如果要正确折叠的,就比较麻烦,可以用真核表达系统试试.Thermo有一种用人细胞裂解液表达的系统,自称修饰系统很好.

蛋白析出问题我的是HIS标签蛋白,超声裂解菌体后12000离心,SDS-PAGE检测目的蛋白大量存在于上清,于是按可溶性重组蛋白的检测通过SDS-PAGE中重组蛋白在蛋白MARKER的位置判断蛋白的表达情况和通过用标签抗体检测重组蛋白判有一蛋白质混合物（重组表达蛋白的菌体裂解混合物）,怎么测定其中目的蛋白的浓度? 融合蛋白 His标签问题 sds page蛋白电泳如何检测包涵体融合蛋白肽指纹图谱分析,该蛋白为带有his标签的多角体融合目的蛋白（his-多角体蛋白-目的蛋白）如何用SDS进行SDS-page 用灰度比进行检测目的蛋白表达相对量的多少,如何解决上样浓度带来的误差?是否能以一个管家 his标签蛋白是什么 sds page蛋白胶怎样保存 sds-page蛋白表达量为什么几乎没有包涵体蛋白超声裂解后,通过离心能将细胞碎片去除吗,怎样的方法能得到比较纯的包涵体可以进行称量计算各位有谁知道GST融合蛋白中混有GST蛋白怎么出去吗,我表达的GST融合蛋白,SDS-PAGE出现两条呆一上一下,基本可