有没有人能帮我解释一下DNA连接质粒时,什么是正向插入什么事方向插入,最好能用图说明一下,

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：生物作业时间：2024/05/13 07:57:17

有没有人能帮我解释一下DNA连接质粒时,什么是正向插入什么事方向插入,最好能用图说明一下,
质粒用的是PMD-19

质粒在你插入的片段上游是有启动子区域的,在插入的时候有时由于是单酶切或者TA克隆或者平末端克隆,你是无法确定基因插入的方向的.如果你插入序列的ATG起始密码子是跟在启动子后面,你就是正向插入,如果你插入序列的终止密码子是在启动子后面,那你就是反向插入了,这时候你插入的序列是不能够正常表达的
再问：启动子是质粒上的还是插入的目的片段上的呢？如果是目的片段上，那插入的片段较小，不具备启动子，那怎么判断呢？是必须要知道启动子吗？
再答：呃启动子是质粒上面必备的元件，如果没有启动子，插入的基因是无法表达的。你的起始密码子也得接在启动子后面，这样就是正向插入，如果后面接的是终止密码子，是反向插入，无法表达的
再问：如果我不做表达，只是想把目的片段连上去，去做灵敏度啊重复性一类的实验，是正向插入还是方向插入都没关系吧？
再答：你如果不需要基因行使功能的话可以不考虑目的片段的方向的，你比如说我只是要得到纯化的插入片段，我不知道你说的灵敏度、重复性是什么实验，无关基因功能，一般也就不需要考虑其方向的

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