我提取的DNA是用试剂盒提取的,最后溶于100微升的缓冲液EB中,用紫外该怎么检测浓度和纯度啊
来源:学生作业帮 编辑:作业帮 分类:生物作业 时间:2024/05/22 08:48:07
我提取的DNA是用试剂盒提取的,最后溶于100微升的缓冲液EB中,用紫外该怎么检测浓度和纯度啊
你取出1微升或2微升,用EB稀释100倍或50倍到100微升,OD260/280的比值在1.8-2.0是比较理想的,代表你的DNA纯度很高.波长260nm时,1OD值相当于双链DNA浓度为50μg/ml,算一下,再乘以你的稀释倍数,就是浓度了
再问: 50或100微升量也太小了,测紫外的时候放在石英比色皿中就没了呀,
再答: 你用的分光光度计木有用微量比色皿吗?如果是要加两三毫升的比色皿,就得按比例先稀释100倍,比如要加3毫升,就加30微升补到3毫升,你一共才100微升,浪费严重啊。最好用微量比色皿,怕浪费就再加大稀释倍数试试吧,
再问: 恩 谢谢 ,那我空白可不可以用三毫升的双蒸水调零,样品就用30微升溶于EB的DNA再用双蒸水稀释至三毫升,不知道可不可以?谢谢啦
再答: 如果EB实在不够用的话,这样也行,但其实用双蒸水也不太妥,你最后用哪种溶液溶解DNA,最好就用这种溶液来进行紫外检测,那30微升EB还是会对结果造成一定影响的,最好用EB调零,也用EB稀释样品,这样让待测样品和空白对照保持一致最好。
再问: 好的 谢谢啦
再问: 50或100微升量也太小了,测紫外的时候放在石英比色皿中就没了呀,
再答: 你用的分光光度计木有用微量比色皿吗?如果是要加两三毫升的比色皿,就得按比例先稀释100倍,比如要加3毫升,就加30微升补到3毫升,你一共才100微升,浪费严重啊。最好用微量比色皿,怕浪费就再加大稀释倍数试试吧,
再问: 恩 谢谢 ,那我空白可不可以用三毫升的双蒸水调零,样品就用30微升溶于EB的DNA再用双蒸水稀释至三毫升,不知道可不可以?谢谢啦
再答: 如果EB实在不够用的话,这样也行,但其实用双蒸水也不太妥,你最后用哪种溶液溶解DNA,最好就用这种溶液来进行紫外检测,那30微升EB还是会对结果造成一定影响的,最好用EB调零,也用EB稀释样品,这样让待测样品和空白对照保持一致最好。
再问: 好的 谢谢啦
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