用CTAB法提植物基因组DNA遇到的问题

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：生物作业时间：2024/05/27 12:53:15

用CTAB法提植物基因组DNA遇到的问题
1、用CTAB法提DNA时,在加入氯仿异戊醇后离心分层,在上层水相上面有时漂有一层东西,影响上清的吸取,请问这上层的东西是如何形成的?有什么方法可以避免或去除?
2、如果使用组织破碎仪（或叫匀浆仪）时怎样避免DNA被打断或降解?

水相与氯仿之间有类似白色的膜,那说明上次抽提的还不是很干净,里面有蛋白之类的杂质. 1、你可以再抽提一次,杂质肯定会减少；2、吸样的时候小心点,不要全吸了,动作轻柔点,不要猛吸,否则杂质也会没吸的.
如果是叶片的话,用液氮冷冻,转速、时间每个仪器都会有些不同,我用的Thmorgan CK1000组织研磨仪是5mm钢珠,1200,2min,水稻叶的.一般水稻种子、棉花籽之类的,就干磨就可以了,研磨后的粉末不建议加裂解液后再磨,我试过,这样在异丙醇析出DNA时,DNA是断裂的.
研磨后最好加裂解液动作快点,尤其是富含酚之类的样品,裂解液中加些PVP40,巯基乙醇之类的抗氧化剂,否则DNA会回火星上去的.

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