作业帮［本科生实验］从酵母中提取RNA的试验中,加碱沸水浴后为什么需要调pH至弱酸性?
来源：学生作业帮 编辑：作业帮 分类：生物作业 时间：2024/04/29 15:00:14
［本科生实验］从酵母中提取RNA的试验中,加碱沸水浴后为什么需要调pH至弱酸性?
具体实验步骤（来自实验指导）：
称5g干酵母粉置于100ml烧杯中,加入40ml0.2%NaOH溶液,沸水浴上加热30min,经常搅拌.
然后加入数滴乙酸溶液使提取液呈酸性（石蕊试纸检查）,3000r/min离心15min.取上清液,加入10ml酸性乙醇,边加边搅动.加毕,静置,待RNA沉淀完全后,离心.
滤渣先用乙醇洗两次,每次用10ml.再用无水乙醇洗两次,每次10ml,洗涤时间可用细玻璃棒小心搅动沉淀.最后用布氏漏斗抽滤,沉淀在空气中干燥.称量所得RNA粗品的重量,
个人推测可能原因：
1.pH5～6为大多数氨基酸的等电点（除苏氨酸、赖氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、丝氨酸外都在6附近吧）,调pH可以沉淀原有的和碱性条件下水解少量蛋白质产生的氨基酸
2.碱性水浴条件下RNA水解为寡聚核苷酸而DNA不水解,调pH为了沉淀DNA（参考生物化学教材上关于稀碱法分离RNA的说法,但实验条件有所不同）
3.为了防止RNA过量水解成小分子而难以在乙醇中沉淀析出（参考生物化学关于RNA化学性质的说法）
问：
真正的目的是什么样的?我的推测正确么?
具体实验步骤（来自实验指导）：
称5g干酵母粉置于100ml烧杯中,加入40ml0.2%NaOH溶液,沸水浴上加热30min,经常搅拌.
然后加入数滴乙酸溶液使提取液呈酸性（石蕊试纸检查）,3000r/min离心15min.取上清液,加入10ml酸性乙醇,边加边搅动.加毕,静置,待RNA沉淀完全后,离心.
滤渣先用乙醇洗两次,每次用10ml.再用无水乙醇洗两次,每次10ml,洗涤时间可用细玻璃棒小心搅动沉淀.最后用布氏漏斗抽滤,沉淀在空气中干燥.称量所得RNA粗品的重量,
个人推测可能原因：
1.pH5～6为大多数氨基酸的等电点（除苏氨酸、赖氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、丝氨酸外都在6附近吧）,调pH可以沉淀原有的和碱性条件下水解少量蛋白质产生的氨基酸
2.碱性水浴条件下RNA水解为寡聚核苷酸而DNA不水解,调pH为了沉淀DNA（参考生物化学教材上关于稀碱法分离RNA的说法,但实验条件有所不同）
3.为了防止RNA过量水解成小分子而难以在乙醇中沉淀析出（参考生物化学关于RNA化学性质的说法）
问：
真正的目的是什么样的?我的推测正确么?
调PH至弱酸主要是为了达到蛋白质的等电点来沉淀蛋白质,然后离心去除蛋白后,还要进一步加酸性乙醇是为了达到rna的等电点（ph约为2）来沉淀rna