我做荧光定量PCR标准曲线时,斜率只有-1.25,扩增效率E很高.为什么呢?

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：生物作业时间：2024/05/18 09:26:58

扩增效率理论上不可能超过2.计算值超过2,可能是因为PCR效率不高或者不稳定,结果线性度差,导致某个区间的数据点计算出来的扩增效率反而大于2.这样的标准曲线如果作图的话,数据点都不在一条直线上.
一般都是试剂扩增效率有问题,离子浓度不对,或者酶比较劣质.也有可能是引物不好.可以先换一对已知有效的引物,比如常见的内参的已验证引物,如果用同样的试剂和体系能做出好的曲线,E接近2,那就是引物问题,如果这样也做不出来,就换试剂.
仅供参考,我很少做外标曲线,只有偶尔更换试剂体系的时候会做个梯度,一般曲线不好的话,取的数据点不同,E值会忽高忽低.整个线就是歪的.基本上都是试剂有问题.引物扩增片段不超过500bp应该不会影响扩增效率.你先把PCR产物电泳看看有没有问题,条带没问题,基本上引物就问题不大.

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