作业帮细菌DNA提取过程中各部药品的作用
来源：学生作业帮 编辑：作业帮 分类：生物作业 时间：2024/05/21 06:17:17
细菌DNA提取过程中各部药品的作用
1.TE
2.SDS、蛋白酶K,37°C,1h
3.NaCl
4.CTAB/NaCl,65°C,20min
5.酚：氯仿：异戊醇（25：:24:1）
6.氯仿：异戊醇
7.异丙醇
8.70%乙醇
9.TE
1.TE
2.SDS、蛋白酶K,37°C,1h
3.NaCl
4.CTAB/NaCl,65°C,20min
5.酚：氯仿：异戊醇（25：:24:1）
6.氯仿：异戊醇
7.异丙醇
8.70%乙醇
9.TE
其实提取细菌基因组DNA并不是要用到上面提到的所有试剂.
TE是用来浮起细菌的.如果是阳性菌的话最好是用溶菌酶处理一下.
SDS可以让细胞裂解,并与核蛋白结合（当然也包括DNA）.蛋白酶K自然是降解蛋白的.到这一步可以直接用异丙醇沉淀,70%乙醇洗一次（洗去少量的盐分）.凉得差不多再用少量TE溶解就得到DNA了.
当然,在蛋白酶K处理过后,也可以用1.4M NaCl沉淀一下蛋白（DNA在此浓度溶解度增加,而蛋白减小）.或者用酚：氯仿：异戊醇（25：:24:1）PH>7.8抽提,去蛋白.其后依旧用异丙醇沉淀,70%乙醇洗.
CTAB/NaCl功能与SDS相当,但一般用于提取植物基因组.
再问： 我所用的方法加试剂流程确实是这样的。加入CTAB后沉淀很明显，前面加入5mol/L NaCl后也有沉淀，但较少。另外，第6步加入氯仿：异戊醇也是为了去蛋白吗？ 加入酚：氯仿：异戊醇（25：24：1）后离心，沉淀没有沉到底部，而是在水相和有机相之间，这是为什么？
再答： 氯仿：异戊醇也可以去蛋白，中间层的沉淀是不溶性的蛋白沉淀。因为密度比酚小，比水大，所以在中间层。细菌基因组是很好提的。你的流程太麻烦，可以再查查资料，减去一些。
TE是用来浮起细菌的.如果是阳性菌的话最好是用溶菌酶处理一下.
SDS可以让细胞裂解,并与核蛋白结合（当然也包括DNA）.蛋白酶K自然是降解蛋白的.到这一步可以直接用异丙醇沉淀,70%乙醇洗一次（洗去少量的盐分）.凉得差不多再用少量TE溶解就得到DNA了.
当然,在蛋白酶K处理过后,也可以用1.4M NaCl沉淀一下蛋白（DNA在此浓度溶解度增加,而蛋白减小）.或者用酚：氯仿：异戊醇（25：:24:1）PH>7.8抽提,去蛋白.其后依旧用异丙醇沉淀,70%乙醇洗.
CTAB/NaCl功能与SDS相当,但一般用于提取植物基因组.
再问： 我所用的方法加试剂流程确实是这样的。加入CTAB后沉淀很明显，前面加入5mol/L NaCl后也有沉淀，但较少。另外，第6步加入氯仿：异戊醇也是为了去蛋白吗？ 加入酚：氯仿：异戊醇（25：24：1）后离心，沉淀没有沉到底部，而是在水相和有机相之间，这是为什么？
再答： 氯仿：异戊醇也可以去蛋白，中间层的沉淀是不溶性的蛋白沉淀。因为密度比酚小，比水大，所以在中间层。细菌基因组是很好提的。你的流程太麻烦，可以再查查资料，减去一些。