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亲们~我要用CTAB方法提取食用菌的DNA,不知道2%的CTAB具体怎么配制啊?我就知道需要用什么药品配,有

来源:学生作业帮 编辑:作业帮 分类:生物作业 时间:2024/05/09 13:27:53
亲们~我要用CTAB方法提取食用菌的DNA,不知道2%的CTAB具体怎么配制啊?我就知道需要用什么药品配,有
100mmol/L Tris-HCL ,pH8.0
20mmol/L EDTA,pH8.0
1.4mol/L NaCl
具体的量是多少?
取1000ml 容量瓶,加12.11克Tris碱、7克NaCl、7.464克EDTA-Na2、20克CTAB,加约900毫升去离子水或双蒸水(没有就用蒸馏水也行),用盐酸分析纯调pH至8.0,后定容至1000毫升,分装于500毫升蓝盖试剂瓶中121度灭菌半小时,冷却后备用.将食用菌子实体小块用液氮研磨,转入大离心管,加入65度预热的CTAB裂解液,温浴30分钟,期间上下颠倒离心管2-3次,后加氯仿:异戊醇(24:1)抽提3-4次,直至看不到中间白色蛋白质层为止.上清转入新离心管,加等体积异丙醇-20度沉淀DNA,离心,风干沉淀,用ddH2O重悬沉淀,加RNA酶消化RNA,然后加3MNaAc和无水乙醇沉淀DNA,离心后用75%漂洗几次,离心,风干沉淀,加双蒸水或TE溶解即可.