作业帮蛋白质,核酸,酶在分离纯化的时候为了防止变性应该注意什么?
来源：学生作业帮 编辑：作业帮 分类：生物作业 时间：2024/05/14 16:00:01
蛋白质,核酸,酶在分离纯化的时候为了防止变性应该注意什么?
蛋白质与核酸分离纯化的时候,需要注意的地方是不同的.对于蛋白质,尤其是酶类首先要注意的就是温度,很多蛋白质都是热敏感性的,你必须要注意低温操作,所有的步骤最好是在4度的环境下进行.接着要注意的就是避免使用一些会造成蛋白质变性的试剂,比如说重金属盐,有机试剂.严格意义上来说,要提取活性酶,任何可能使蛋白质沉淀的试剂和方法都要避免使用.最好就是直接在液体环境下进行,比较理想的方法就是色谱柱层析.然后,实际上为了防止蛋白质在提取过程中被释放的内源性蛋白酶（木瓜蛋白酶,枯草蛋白酶等等）降解蛋白质,还需要在提取环境中加入适当的蛋白酶抑制剂.
对于核酸,DNA和RNA分离的时候要求也不同.对于DNA,这是一种非常稳定的物质,一般来说只要防止内源性的DNA酶降解,目前发现的DNA酶都需要二价金属离子辅助的（如镁离子,钙离子）,所以加入二价金属离子螯合剂EDTA就可以抑制DNA酶的活性.DNA提取纯化过程中最主要的问题就是长链DNA的物理损伤,所以操作过程中一定要轻柔,忌剧烈振荡.
对于RNA分子,RNA分子是一类非常不稳定的物质.而且对RNA酶特别敏感,而RNA酶是一种无处不在的酶,灰尘与空气以及人体的唾液和皮肤都有RNA酶的存在,而且RNA酶是一种非常稳定的酶,强酸强碱以及一般高温高压灭菌程序都不能使其彻底变性,而且它并不需要任何辅助因子就能发挥酶活性.所以在提取过程中,所有器材都需要灭RNA酶处理（0.1%DEPC水浸泡过夜,再灭菌处理）.整个提取过程中戴手套操作,并且手套要经常换.避免在实验过程中说话.
再问： 少了酶的……还不错~
再答： 不，酶的提取我涵盖在蛋白提取内了，酶的提取和蛋白提取基本是一致的，只不过要求更严格。后面所说的避免任何使蛋白质沉淀的试剂和方法主要是针对有活性的酶提取的。如果不需要有活性的酶，可以使用温和的变性剂，如硫酸铵和丙酮来提取。
对于核酸,DNA和RNA分离的时候要求也不同.对于DNA,这是一种非常稳定的物质,一般来说只要防止内源性的DNA酶降解,目前发现的DNA酶都需要二价金属离子辅助的（如镁离子,钙离子）,所以加入二价金属离子螯合剂EDTA就可以抑制DNA酶的活性.DNA提取纯化过程中最主要的问题就是长链DNA的物理损伤,所以操作过程中一定要轻柔,忌剧烈振荡.
对于RNA分子,RNA分子是一类非常不稳定的物质.而且对RNA酶特别敏感,而RNA酶是一种无处不在的酶,灰尘与空气以及人体的唾液和皮肤都有RNA酶的存在,而且RNA酶是一种非常稳定的酶,强酸强碱以及一般高温高压灭菌程序都不能使其彻底变性,而且它并不需要任何辅助因子就能发挥酶活性.所以在提取过程中,所有器材都需要灭RNA酶处理（0.1%DEPC水浸泡过夜,再灭菌处理）.整个提取过程中戴手套操作,并且手套要经常换.避免在实验过程中说话.
再问： 少了酶的……还不错~
再答： 不，酶的提取我涵盖在蛋白提取内了，酶的提取和蛋白提取基本是一致的，只不过要求更严格。后面所说的避免任何使蛋白质沉淀的试剂和方法主要是针对有活性的酶提取的。如果不需要有活性的酶，可以使用温和的变性剂，如硫酸铵和丙酮来提取。