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western blot 中,前面跑胶加热蛋白变性了,为什么后面还能跟抗体特异性结合.

来源:学生作业帮 编辑:作业帮 分类:综合作业 时间:2024/05/08 23:40:31
western blot 中,前面跑胶加热蛋白变性了,为什么后面还能跟抗体特异性结合.
变性是某些构象和结构发生改变,决定抗体抗原结合的是抗原上的抗原决定簇.抗原决定簇是由6-12氨基酸或碳水基团组成,它可以是由连续序列(蛋白质一级结构)组成或由不连续的蛋白质三维结构组成.
在WB中抗体结合在抗原决定簇上.抗原决定簇有线性的也有非线性的(即有三维结构).也就是说并不是所有抗体都可以用来做WB,有些抗体与抗原的结合位点在抗原的线性决定簇上或者不受自身变性影响,这些抗体就可以用来做WB.而有些抗体结合的位点随着蛋白的变性,就不能结合到抗原上.
仔细看下抗体的说明书你就会发现每个抗体在各个实验方法中(WB,免疫荧光,免疫组化,流式细胞等)的适用范围是不一样的.