我今天用紫外可见分光光度计扫描细菌菌悬液,细菌最大吸光波长在紫外区,波长为202,这是怎么回事?
来源:学生作业帮 编辑:作业帮 分类:生物作业 时间:2024/05/07 07:09:50
我今天用紫外可见分光光度计扫描细菌菌悬液,细菌最大吸光波长在紫外区,波长为202,这是怎么回事?
细菌菌悬液是用纯净水稀释细菌而制备成的,在400~800可见光范围内没有出现最高峰.当在190~800波长扫描时,在202处出现最高峰.这个值正常吗?理论不是OD600吗?如有专业人士答疑,倍感欣慰.
细菌菌悬液是用纯净水稀释细菌而制备成的,在400~800可见光范围内没有出现最高峰.当在190~800波长扫描时,在202处出现最高峰.这个值正常吗?理论不是OD600吗?如有专业人士答疑,倍感欣慰.
你理解错了OD600的含义.理论上OD600处的吸光值与细胞的浓度成正比,而不是说这里的吸光值最大,因为你是要来定量检测用的.你的扫描结果没问题,这只能说明此处的紫外吸收最强.希望看到400~800可见光范围内扫描结果.
再问: 谢谢您的回答,原来这样,202可能是核酸的最大吸收波长。在400~800可见光范围内扫描是没有峰值出现的,曲线都是很平滑上升的,只是在600时出现一个拐点(不是峰值)。OD600是发酵里常用的,如果我想选用一个精确的吸光值来测量细胞的浓度,这个值应该怎么确定呢?
再答: 你这次给出的图好像是上一张的截图,跟上面的一样,没有意义。你如果是把吸光值的量程缩小可能就发现规律了,比如把量程缩小到0-0.2,你上一张图的量程吸光值从-0.384到4.224太大了,即便是600纳米处有点儿波动也看不到啊!比如波动0.02在你这个量程下就看不到,在0-0.2量程下就看到很清楚。其实也没必要选更精确的吸光值,因为发酵液中产生吸光的物质不一定都是细菌,培养基的某些成分也有吸光值,这种方法本来就是一种粗略测定细菌相对含量的方法,如果希望精确些,要把培养基的成分清洗掉,比如离心,可是清洗的过程可能会破坏一少部分细胞。
再问: 谢谢您的回答,原来这样,202可能是核酸的最大吸收波长。在400~800可见光范围内扫描是没有峰值出现的,曲线都是很平滑上升的,只是在600时出现一个拐点(不是峰值)。OD600是发酵里常用的,如果我想选用一个精确的吸光值来测量细胞的浓度,这个值应该怎么确定呢?
再答: 你这次给出的图好像是上一张的截图,跟上面的一样,没有意义。你如果是把吸光值的量程缩小可能就发现规律了,比如把量程缩小到0-0.2,你上一张图的量程吸光值从-0.384到4.224太大了,即便是600纳米处有点儿波动也看不到啊!比如波动0.02在你这个量程下就看不到,在0-0.2量程下就看到很清楚。其实也没必要选更精确的吸光值,因为发酵液中产生吸光的物质不一定都是细菌,培养基的某些成分也有吸光值,这种方法本来就是一种粗略测定细菌相对含量的方法,如果希望精确些,要把培养基的成分清洗掉,比如离心,可是清洗的过程可能会破坏一少部分细胞。
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