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既然有了标记基因对目的基因的存在进行检测 那为什么还要通过DNA分子杂交技术检测检查阿?还有什么是DNA分子杂交技术啊

来源:学生作业帮 编辑:作业帮 分类:生物作业 时间:2024/05/12 17:59:07
既然有了标记基因对目的基因的存在进行检测 那为什么还要通过DNA分子杂交技术检测检查阿?还有什么是DNA分子杂交技术啊 书本上说的是探针 杂交带什么的 看不懂书上说的
首先要明白,这里的标记基因针对的是基因工程操作,如果需要克隆一个基因,需要把这个基因重组到载体中去,进一步把重组载体送到受体细胞中.
但是这个基因不一定是纯的,可能和其他的DNA片段混合在一起,发生重组的载体就可能有两类,一类是重组了目的基因的,一类是重组了非目的基因的.当然还有未发生重组的空载体.
进而发生转化(载体进入受体细胞)是可能有三种情况:一是未重组的载体进入受体细胞;二是重组目的基因的载体进入受体细胞;三是重组非目的基因的载体进入受体细胞.
那么就有两个问题要解决:一是如何判断重组载体进入受体细胞了;二是如何判断重组有目的DNA的载体进入受体细胞.
标记基因因为存在于载体上,可以作为受体细胞接受外来载体的标志(不论是何种载体);如果重组载体与DNA重组的位置在另一标记基因内部,则可能导致该标记基因失活.那么两个遗传标记都存在的就是空载体发生转化,只有一个遗传标记的是重组载体发生转化.
但是如何判断重组有目的DNA的载体进入受体细胞?
可以采用分子杂交的方法,实质就是用目的基因的序列(探针)去跟未知的受体细胞中的DNA杂交,如果能够杂交,说明该受体细胞中含有和探针序列相同的DNA(就是重组有目的基因的载体).而这种杂交一般发生在固体支持介质上(比如琼脂糖凝胶或者硝酸纤维膜等),杂交信号表现的是一个条带,称之为杂交带.
总结起来就是遗传标记能筛选出接受重组载体的受体细胞;DNA分子杂交技术检测接受重组有目的基因载体的受体细胞.
再问: 书上还说 标记基因的作用还有一项是将含有目的基因的细胞筛选出来 那是不是意味着将目的基因成功进入了的受体细胞进一步进行培育得到转基因生物 而单纯的进入受体细胞的目的基因也不能保证每一个都能表达性状 从而要通过DNA分子杂交技术来进行检验?
再答: 前提是能够确定用于重组的是纯的基因,这时只要有标记基因就意味着重组载体进入细胞中了,可以直接认定目的基因进入受体细胞,这种细胞就含有目标基因了。如果不能保证用于重组的DNA是纯的,就必须以分子杂交的方式确认接受目的基因的细胞(所谓的期望重组子)。 但是目的基因进入受体细胞未必就会发生表达,而且基因工程操作的目的不同,对目的基因是否表达的要求也不同。比如单纯的克隆目的基因,就不需要表达;如果是进行生物转基因改造,或者生产某种转基因产品(比如激素之类的),就需要进行表达了。 对于是否表达的判断有很多方法,分子杂交也是可以的,但是检测的对象不是目的基因而是目的基因转录形成的mRNA;也可以用免疫学方法检测,或者表达产物功能检测,或者目的基因本身就能产生某些可见的形状(这种情况就不用像前面的遗传标记、分子杂交那么复杂,直接判别就可以了)。