我想扩增某一目的基因,请问引物一定要在起始密码子和终止密码子周围设计吗?

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：综合作业时间：2024/05/14 11:54:26

我想扩增某一目的基因,请问引物一定要在起始密码子和终止密码子周围设计吗?
我可不可以在起始密码子前面的一段序列中设计引物?我以前是这样设计的,但是一直都扩不出来,怎么办?

如果只想做序列的克隆,那么引物往两端延伸没问题.
如果要做蛋白表达的话起始端必须是起始密码子.引物不可以在起始密码子之前,否则影响表达起始.
扩不出来的话,首先分析一下序列,是否GC含量较高.
然后尝试一下延长引物序列,用软件分析一下两引物的互补性,防止形成引物二聚体.
再然后就是做一下温度梯度,用好一点的酶等等.
再问：我的上游引物加了酶切位点后有6对碱基自身互补，影响大吗？两引物的互补性达到多少才会形成引物二聚体？
再答：其实有互补没关系，引物互相匹配也没关系。最关键的是引物的3'末端最后一个碱基不能匹配，否则引物相互延伸就不再能够匹配你的序列了。

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