作业帮如何应用流式细胞仪检测荧光蛋白的表达量?
来源：学生作业帮 编辑：作业帮 分类：生物作业 时间：2024/05/15 19:26:51
如何应用流式细胞仪检测荧光蛋白的表达量?
请各位前辈指教：想要通过检测EGFP的表达量知道与其融合表达的基因的表达情况.是否可以应用流式细胞仪完成?上流式细胞仪之前对细胞应该做什么样的处理?
请各位前辈指教：想要通过检测EGFP的表达量知道与其融合表达的基因的表达情况.是否可以应用流式细胞仪完成?上流式细胞仪之前对细胞应该做什么样的处理?
可以.这个是流式细胞仪一个常见的应用.
上流式细胞仪以前,需注意的是
1.细胞打散到单细胞的悬液,没有聚团成块.如果有顾虑的话用纱网过滤一次才用.
2.细胞悬液的浓度不能过高和过低.详请参考你的仪器说明建议值.我的经验每毫升一百万足足够了.少些读取慢些也没有大问题,一支样品少过十万的话,就很容易得不到足够的数据.太多则读取过快,准确性可能降低,更多更危险,可能造成仪器管道堵塞.
3.如果上机时间能保证,细胞直接打散均匀在PBS里面就可以上机了,除了贴壁细胞需要的胰酶处理按照普通传代步骤来做,之后洗一次,没有什么其他处理.如果细胞悬液制好后可能需要等待（超过半小时）,则用1-2%多聚甲醛或福尔马林溶液保存细胞.注意避光避免丢失荧光信号.这样保存放4度冰箱一两个礼拜之后也还是可以上机,误差不大.
上流式细胞仪以前,需注意的是
1.细胞打散到单细胞的悬液,没有聚团成块.如果有顾虑的话用纱网过滤一次才用.
2.细胞悬液的浓度不能过高和过低.详请参考你的仪器说明建议值.我的经验每毫升一百万足足够了.少些读取慢些也没有大问题,一支样品少过十万的话,就很容易得不到足够的数据.太多则读取过快,准确性可能降低,更多更危险,可能造成仪器管道堵塞.
3.如果上机时间能保证,细胞直接打散均匀在PBS里面就可以上机了,除了贴壁细胞需要的胰酶处理按照普通传代步骤来做,之后洗一次,没有什么其他处理.如果细胞悬液制好后可能需要等待（超过半小时）,则用1-2%多聚甲醛或福尔马林溶液保存细胞.注意避光避免丢失荧光信号.这样保存放4度冰箱一两个礼拜之后也还是可以上机,误差不大.
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