做realtime-pcr时,绝对定量标准曲线的制作

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：生物作业时间：2024/05/20 05:18:22

做realtime-pcr时,绝对定量标准曲线的制作
我第一次做realtime pcr,是做转基因拷贝数的鉴定.我是拿到公司去做,但是公司要求提供做绝对定量标准曲线的标准品,标准品该怎么制备?我查了一些文献,上面说把含有转基因的质粒DNA与野生型的gDNA混合制备,我对此有一些迷惑：1 做realtime pcr应该是用RNA吧,怎么做标准曲线是用gDNA呢?2 标准品到底应该怎么做,能不能提供一下具体的步骤?

博凌科为-为你首先,你连基本概念都没弄清楚,怎么做实验?real time pcr用RNA?是你把它和reverse transcription PCR搞混了吧?虽然首写字母都是RT,但也不至于这么糊涂的.你先查下基本概念,知道自己要做的是什么东西,后面会顺利很多.第二个问题,我在你的另一个提问里已经回答了.至于混合制备,可能是考虑到转基因和野生型之间的同源性,用来检测引物或探针特异性的.

荧光定量PCR绝对定量时的标准曲线优劣的判断指标有哪些呢? realtime ）就是想做个梯度稀释的cDNA的标准曲线,请问我应该怎么做,我用的是Roche的荧光定量PCR仪,请问 RT-PCR的绝对定量的标准曲线荧光定量pcr做荧光定量pcr的绝对定量时为什么要构建标准质粒,利用质粒构建标准曲线,为什么不直接用DNA模板构建标准曲荧光定量PCR 标准曲线的制作是不是可以软件自动生成的! 请问做实时荧光定量PCR实验时,为什么做标准曲线? 请问做荧光定量PCR时每次都需要做标准曲线吗? 什么是realtime-PCR溶解曲线 real-time PCR相对定量2 -△△CT法中用来判断扩增效率的标准曲线怎么制作? 实时定量pcr内参以及相对标准曲线的问题荧光定量pcr,做标准曲线时,同一个样品做三个点,我做的三个点之间的距离很远什么原因荧光定量PCR做标准曲线,普通PCR扩增效果良好,荧光定量PCR标准曲线作图斜率只有1.02,是什么原因?