我从PMD18-T上克隆目的基因,用的是Ecor I 和Not I酶切位点,引物Not I只有一个保护碱基,这样可以吗?

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：语文作业时间：2024/05/14 16:38:46

一般最少要四个啊.楼主当时怎么就只加了一个呢?浪费了一条引物.
楼主最好不要抱着侥幸心理试验能不能切开了,因为NotI酶很贵的,与其试验能不能切开不如直接再去合成引物了.
另外PMD-18这么难用的载体还真的有人在用?
再问： PMD-18T为什么难用呢？Not I酶还可以，不是从PMD上很好PCR吗？
再答：看错了，我用过PMD18-T simplevector，上面竟然没有多克隆位点。楼主是先把片段克隆进T载体，然后再通过PCR加接头酶切连入表达载体是吧？那就再重新设计一条下游引物吧，加四个保护碱基。NotI不是特别贵，但是超过一条引物的价钱，另外如果要验证能不能切开需要的时间也超过了引物合成的时间，对时间金钱都是一种浪费。

TAKARA的PMD18-T载体可以用哪个通用引物验证?用了TAKARA的PMD18-T载体转入了目的片段,想用PCR验酶切位点如何选择,我正向引物和反向引物的酶切位点选择的是BamHI,和Xho I,可以吗想用PCR扩增下面一段序列,急求高手写出上游引物和下游引物.要求上游加EcoRⅠ酶切位点、下游加BamH I酶 2011年江苏高考卷的最后一题,他问一个同学设计了一对引物,该引物不合理是因为引物I和引物II局部发生碱基互补配对而失效用PCR技术合成目的基因是的引物只能是一条模板一个引物吗还是可以多个?还有启动子和终止子,一个从NCBI上查找到的一个目的基因做PCR,设计引物时PCR产物长度是这个基因的全部序列吗? 例题是：限制酶是一种核酸内切酶,可识别并切割DNA分子上特定的核苷酸碱基序列.下图为四种限制酶BamH I、EcoR．I 我的英语不好这样翻译可以吗：i'm not good of english 为什么pcr 引物设计出来,下游引物加上酶切位点和保护碱基后,有一个Tm值是负值呀? 目的基因上游引物中引入了终止密码,而原核表达载体上有ATG,这样我的目的基因能被表达出来吗? 设计的引物19个碱基,其中包括6 bp的酶切位点和3个保护碱基,和模板配对的只有11个碱基,是不是太短? not...until这个句式可以这样用么?为什么?I didn't believe I could do it unt