作业帮ELISA为什么所有孔都完全没颜色
来源：学生作业帮 编辑：作业帮 分类：生物作业 时间：2024/05/17 05:03:55
ELISA为什么所有孔都完全没颜色
ELISA自己包被抗体—封闭—加样—二抗—HRP—TMB显色,上述步骤应该是对的,为什么所有孔都完全没颜色,做了6次了,怎么知道是哪一步出问题了,求大神解答!
ELISA自己包被抗体—封闭—加样—二抗—HRP—TMB显色,上述步骤应该是对的,为什么所有孔都完全没颜色,做了6次了,怎么知道是哪一步出问题了,求大神解答!
全是阴性?
你的试验想检测什么?检测抗原?检测抗体?
你这个实验思路问题很大.
你自己先固定抗体,加样,是不是加抗原?再加二抗,请问,加不加这个样,也就是加不加这个抗原,影响实验结果吗?酶标二抗是和抗体结合的.还有你的二抗和一抗之间中间隔了个抗原,二抗还能和抗体结合吗?
再问： 是想检测抗原的，固定的一抗可以和抗原反应，同时也能和酶标二抗反应，不存在有东西隔在中间的情况。这个实验思路是标准的啊，教科书和百度上都是这么做的。
再答： 你这个实验是不是，出现阴性结果，就是样品是阳性？
我解释一下，你实验出现的问题：
固定一抗，直接加酶标二抗，二抗结合上去，酶也结合上去，冲洗，去掉未结合的酶标二抗，加显色剂，阳性。
固定一抗，加抗原反应。加酶标二抗，如果抗原不影响酶标二抗和抗体结合的话，酶标二抗和一抗结合，冲洗未结合的二抗，加显色剂，阳性。
那么，请问，加不加抗原，结果有什么不同？只有你的方法的结果是阴性的，才有说服力，不过靠阴性反应来确定抗原是不是存在，有点不靠谱。
你的试验想检测什么?检测抗原?检测抗体?
你这个实验思路问题很大.
你自己先固定抗体,加样,是不是加抗原?再加二抗,请问,加不加这个样,也就是加不加这个抗原,影响实验结果吗?酶标二抗是和抗体结合的.还有你的二抗和一抗之间中间隔了个抗原,二抗还能和抗体结合吗?
再问： 是想检测抗原的，固定的一抗可以和抗原反应，同时也能和酶标二抗反应，不存在有东西隔在中间的情况。这个实验思路是标准的啊，教科书和百度上都是这么做的。
再答： 你这个实验是不是，出现阴性结果，就是样品是阳性？
我解释一下，你实验出现的问题：
固定一抗，直接加酶标二抗，二抗结合上去，酶也结合上去，冲洗，去掉未结合的酶标二抗，加显色剂，阳性。
固定一抗，加抗原反应。加酶标二抗，如果抗原不影响酶标二抗和抗体结合的话，酶标二抗和一抗结合，冲洗未结合的二抗，加显色剂，阳性。
那么，请问，加不加抗原，结果有什么不同？只有你的方法的结果是阴性的，才有说服力，不过靠阴性反应来确定抗原是不是存在，有点不靠谱。