想要将一个外源基因插入到18SrDNA里,如何设计引物?

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：生物作业时间：2024/05/26 19:27:20

你是要将载体（含外源基因）整合到基因组中的18S位置吧?
光靠引物是做不了的,你需要构建一个载体,除了你期望的表达部件外,载体中再插入一段18SrDAN序列就行了.然后你要看是什么宿主,同源整合的话一般需要多长的同源片段.用Primer Primer等软件遵循通常的引物设计要求设计引物,两端加上所需要的酶切位点,扩增大约1kb（假设）的18SrDNA序列,酶切后连到你的表达载体中就行了.
再问：谢谢你这么详细的回答。但是我还想问一下，如果不用载体，直接通过SOE PCR 的方法呢？能直接将外源基因整合上18S 位置吗？
再答：整合是必须将外源基因搞到宿主细胞里，然后才能发生，携带外源基因的核酸片段是必须的。 SOE PCR可以在体外将两个核酸片段连到一起，你能得到的是既有18S又有外源基因的片段。但要整合到18S位置还需要将它打到宿主细胞内，期望其发生同源整合。线性化的核酸做基因转化是可以的，不过外源基因、筛选Marker加起来，一般都好几K了，完全通过PCR方法构建很难的。

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