作业帮用CaCl2制备感受态细胞怎么总是失败
来源：学生作业帮 编辑：作业帮 分类：生物作业 时间：2024/05/14 01:44:33
用CaCl2制备感受态细胞怎么总是失败
我都是按照文献的步骤做的.最后用50ng/μl的DNA稀释10倍,取0.5μl去转化结果板上只长了不到10个菌落,为什么会这样啊?我已经做过很多次了都差不多~
我都是按照文献的步骤做的.最后用50ng/μl的DNA稀释10倍,取0.5μl去转化结果板上只长了不到10个菌落,为什么会这样啊?我已经做过很多次了都差不多~
1、 取大肠杆菌原始菌株（无外源质粒）单菌落接种于5mlLB培养液中,37℃,摇荡过夜；
2、 取1ml过夜培养物接种于100mlLB培养液中,37℃振荡培养1-3小时,待细菌达到对数生长期（OD600为0.5-0.6）即可；
3、 将培养液转移到两只预冷的50ml无菌离心管中,置冰上10分钟,使菌液冷却到0℃,JA-25.5转头（要预冷）5000rpm、4℃离心15min；
4、 弃上清,每只离心管加入10ml冰冷的0.1M无菌CaC12将菌体重悬,冰浴放置30分钟,JA-25.5转头5000rpm、4℃离心5min；
5、 每只离心管加入2ml冰冷保存液（1.7ml 0.1MCaC12和0.3ml无菌甘油）重悬沉淀,将两管混合,按每样200ul分装于无菌1.5ml离心管中；
6、 迅速放置于-80℃保存备用.
注意： 事先准备三个小瓶子,0.1M CaCl2 10ml/瓶 X 2、保存液 4ml X 1.
制备前一天准备好溶液并灭菌.超净台操作时不要用酒精灯或远离之.
楼主核对下~~任何疑问百度我
其实正如楼上所说 cacl2效果真的不咋样
2、 取1ml过夜培养物接种于100mlLB培养液中,37℃振荡培养1-3小时,待细菌达到对数生长期（OD600为0.5-0.6）即可；
3、 将培养液转移到两只预冷的50ml无菌离心管中,置冰上10分钟,使菌液冷却到0℃,JA-25.5转头（要预冷）5000rpm、4℃离心15min；
4、 弃上清,每只离心管加入10ml冰冷的0.1M无菌CaC12将菌体重悬,冰浴放置30分钟,JA-25.5转头5000rpm、4℃离心5min；
5、 每只离心管加入2ml冰冷保存液（1.7ml 0.1MCaC12和0.3ml无菌甘油）重悬沉淀,将两管混合,按每样200ul分装于无菌1.5ml离心管中；
6、 迅速放置于-80℃保存备用.
注意： 事先准备三个小瓶子,0.1M CaCl2 10ml/瓶 X 2、保存液 4ml X 1.
制备前一天准备好溶液并灭菌.超净台操作时不要用酒精灯或远离之.
楼主核对下~~任何疑问百度我
其实正如楼上所说 cacl2效果真的不咋样
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