不同细胞siRNA转染效率的检测问题

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：生物作业时间：2024/05/15 05:30:03

不同细胞siRNA转染效率的检测问题
(1)最近在做RNAi,用的siRNA,然后Real-Time PCR,发现抑制率仅20-30%左右,与说明书说的70-90%相去甚远,咨询相关人员后,认为可能是转染效率的问题,如果转染效率仅有20-30%, 那抑制20-30%也就不少了.因此想请教一下,一般不同细胞通常转染效率是多少?我用的是MT4(悬浮)、CEM(悬浮)、HepG2(贴壁)听说悬浮细胞转染效率要低,原代更低,贴壁好一些,是否如此?(2)针对GFP的siRNA是不是在设计siRNA时就将GFP的表达序列设计进去?

博凌科为1.通常情况下悬浮细胞转染效率较低,贴壁细胞的转染效率因细胞不同,有些很高有些很低.HepG2的DNA转染效率大概有50%,siRNA暂时没做过.如果你有GFP质粒和针对GFP的siRNA共转染,用只转染GFP质粒的孔做对照,可以看出转染效率.如果没有针对GFP的siRNA就只能转染GFP质粒,一般情况下转染DNA好的话,转染siRNA也不会差的.个人觉得细胞本身的性质决定了转染效率.2.不是的.针对GFP的siRNA和我们通常用的化学合成的siRNA一样,只不过是针对GFP基因的.

siRNA转染细胞的方法质粒转染细胞第一次预实验转染效率较好,再做就转不进去了或者转染效率不到5%,是质粒反复冻融的问题吗? 用流式细胞仪分析细胞转染效率的原理是什么在哺乳动物细胞转染实验中为提高转染效率需要注意哪些问题思考题,在哺乳动物细胞转染实验中为提高转染效率需要注意哪些问题在哺乳动物细胞转染实验中味提高转染效率需要注意哪些问题质粒转染细胞不表达的问题~ 质粒转染肺癌细胞,转染效率一般能有多少? siRNA转染肝癌HEPG2细胞,沉默miRNA是什么意思?是为了沉默miRNA的靶基因吗?需要构建质粒载体吗? 想请教您关于流式的问题,用一个双荧光载体转染细胞,其中用RFP验证转化效率,GFP验证工作效率哪里细胞的质粒转染做得好? 流式细胞仪测细胞转染效率,需要做其他处理吗?