想请教您关于流式的问题,用一个双荧光载体转染细胞,其中用RFP验证转化效率,GFP验证工作效率

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：生物作业时间：2024/05/15 17:44:47

想请教您关于流式的问题,用一个双荧光载体转染细胞,其中用RFP验证转化效率,GFP验证工作效率
用一个双荧光载体转染细胞,其中用RFP验证转染效率,GFP验证核酸酶工作效率（即GFP本来不发光,只有当核酸酶作用之后才能发光,作用效率顶多20%）,在过流式的时候需要怎样调节参数啊?为什么我过流式的时候细胞大都在右上角呢,应该红光在左上角,红绿光都有的在右上角啊?

首先,你这个实验室双色的,就要做compensation.技师应该和你说明的啊.如果你自己做的话,我简单和你说一下：
RFP和GFP的激发光谱有部分是重叠的,所以必须在检测的时候去掉重叠的部分（compensation）.
你必须有三组细胞来做这个：1.转染空白质粒的细胞,用来设定GFP和RFP的阳性gate.2.RFP 单独阳性的细胞,调compensation参数,使GFP通道的读数和第一组系统.3.GFP单独阳性的细胞,调RFP通道的读数和第一组相同.
做完compensation后,你才可以在四象限图上检测你的实际样本.
根据你的描述,我估计你RFP是设在了纵坐标,GFP设在了横坐标.你现在细胞都在右上角,说明你没有做compensation,由于RFP的信号同时也在GFP的通道被检测到,所以就发生了这种情况.

想请教您关于流式的问题,用一个双荧光载体转染细胞,其中用RFP验证转化效率,GFP验证工作效率第一次做转染试验,请问怎样计算转染率,载体是带GFP的,就是弄不明白是用荧光的个数比上接种细胞总数吗 GEP转染细胞能不能用Annexin5和PI双染检测凋亡,GFP的荧光会不会影响流式检测的结果现给你一个质粒载体,需要验证其上是否有全长约2.6kb的绿色荧光蛋白基因,用什么方质粒转染细胞第一次预实验转染效率较好,再做就转不进去了或者转染效率不到5%,是质粒反复冻融的问题吗? 满病毒转染后带绿色荧光的待检细胞要去做流式,测凋亡,应该用什么凋亡试剂盒呢? 细胞转染后带cy3红色荧光,可否用Annexin V 和 PI进行流式检测? 请教一个双元表达载体的问题,双元表达载体系统代表农杆菌转化需要两个质粒吗? 关于《验证牛顿第二定律》的实验的问题关于载体构建的问题我要构建一个GFP表达载体标记人体骨髓间充质干细胞的黏着斑,我想问一下这个载体的目的基因怎么获得?质粒关于验证牛顿第二定律的实验误差问题用流式细胞仪分析细胞转染效率的原理是什么