作业帮EMSA实验为何需要设置许多组对照实验?目的何在?
来源：学生作业帮 编辑：作业帮 分类：生物作业 时间：2024/05/22 09:47:32
EMSA实验为何需要设置许多组对照实验?目的何在?
EMSA实验1,阴性对照反应(标记探针)；2,常规反应(含激活的目的转录因子的核蛋白＋标记探针)；3,探针冷竞争反应(含激活的目的转录因子的核蛋白＋标记探针＋标记探针100倍量的未标记探针)；4,突变探针的冷竞争反应(含激活的目的转录因子的核蛋白＋标记探针＋标记探针100倍量的未标记突变探针)；5,Super-shift反应(含激活的目的转录因子的核蛋白＋标记探针＋目的转录因子的特异抗体).
EMSA实验1,阴性对照反应(标记探针)；2,常规反应(含激活的目的转录因子的核蛋白＋标记探针)；3,探针冷竞争反应(含激活的目的转录因子的核蛋白＋标记探针＋标记探针100倍量的未标记探针)；4,突变探针的冷竞争反应(含激活的目的转录因子的核蛋白＋标记探针＋标记探针100倍量的未标记突变探针)；5,Super-shift反应(含激活的目的转录因子的核蛋白＋标记探针＋目的转录因子的特异抗体).
每个对照组的目的：
1.看光有探针,没有其他成分时,探针的位置,应该位于最下方.不然说明探针里面有杂质,影响电泳
2.这个是看蛋白和探针的结合,是实验目的
3.看探针结合的特异性.如果冷探针可以竞争结合,阻碍了标记的探针,说明2中的结合是特异的
4.目的和3相同.突变的冷探针应该对2的结果没有影响
5.也是判断特异性,这次是看蛋白的特异性,和抗体结合后,就会有super-shift.如果没有,说明是其他的蛋白结合.
再问： 3. 看探针结合的特异性。如果冷探针可以竞争结合，阻碍了标记的探针，说明2中的结合是特异的
Ps:冷探针可以竞争结合不是说明实验中的标记探针不是非特异性，是特异性？
此外突变探针和不突变探针到底在实验中到底有什么不同了？
再答： 你的理解有问题。冷探针和同位素标记的探针序列是一样的。但是量大大超过，所以可以竞争结合。这就可以说明这个序列是特异的。冷探针也是和该蛋白特异结合的。这里要看的不是是否是同位素标记的探针特异性结合，而是和这个序列特异性结合。
再问： 噢噢 这个我明白了 谢谢你的耐心解答 分给你了
1.看光有探针,没有其他成分时,探针的位置,应该位于最下方.不然说明探针里面有杂质,影响电泳
2.这个是看蛋白和探针的结合,是实验目的
3.看探针结合的特异性.如果冷探针可以竞争结合,阻碍了标记的探针,说明2中的结合是特异的
4.目的和3相同.突变的冷探针应该对2的结果没有影响
5.也是判断特异性,这次是看蛋白的特异性,和抗体结合后,就会有super-shift.如果没有,说明是其他的蛋白结合.
再问： 3. 看探针结合的特异性。如果冷探针可以竞争结合，阻碍了标记的探针，说明2中的结合是特异的
Ps:冷探针可以竞争结合不是说明实验中的标记探针不是非特异性，是特异性？
此外突变探针和不突变探针到底在实验中到底有什么不同了？
再答： 你的理解有问题。冷探针和同位素标记的探针序列是一样的。但是量大大超过，所以可以竞争结合。这就可以说明这个序列是特异的。冷探针也是和该蛋白特异结合的。这里要看的不是是否是同位素标记的探针特异性结合，而是和这个序列特异性结合。
再问： 噢噢 这个我明白了 谢谢你的耐心解答 分给你了