我现在提土壤总DNA,DNA提不出来,可是用16srna可以扩出来,这是怎么回事呢?

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：综合作业时间：2024/05/08 00:34:58

你怎么知道提不出来?提DNA时有没有DNA被提取出来不能用眼睛判断,即便用分光光度计测量或用电泳后染色也不一定行,主要要看土壤中的DNA的量的多少,PCR的灵敏度很高,因此只要有极其微量的微生物DNA,就能扩出来,当然你要排除是污染的.
再问：恩你说得对啊，不过我提完后有白色的晶体，加水就溶解了，不知那是什么？可是老师要求看到DNA才行。否则后面的就没有说服力。
再答：白色晶体是盐，你在哪一步用了太高盐浓度的溶液，或者在抽提缓冲液中有盐，沉淀DNA前又加了盐溶液，用70%乙醇洗几次或者加水溶解后重新沉淀能逐渐减少。一定要看到DNA的要求是不对的，老师的说法不一定对，除非他知道样品中的DNA量。
再问：没有呀，缓冲液我都没有加盐的，今天有做一批，还是没有呢。急死了!有联系方式吗？想具体i向您请教。
再答：如果只用TE缓冲液的话就应该注意TE的配方，Tris 是10mM，EDTA是1mM，如果用了母液那肯定会沉淀，特别是EDTA；还有就是SDS，在消化液中会加，有时也会随乙醇沉淀出来。
再问：我今天对样品进行了洗盐，然后发现晶体没有那么多了，可还是提不出来，只有一个样有，也不是很亮，是不是里面的杂质没有除干净？
再答：提DNA的好坏最关键还是样品的质量，如果样品中都没有多少DNA的话怎么可能得到足够多的DNA呢？组织样品提到足够多的DNA是合理的，而土壤样品的DNA量完全无法简单推测，如果没有把握，不必追求眼睛或直接染色就能看到的量。如果一定要提高产量，第一，需要增大样品量，第二需要减少每步抽提的损失。但增大样品量意味着抽提缓冲液的体积也大大增加，当你沉淀时，从样品以及缓冲液来的盐分也会大大增加，你可以在沉淀DNA前加醋酸铵而不是醋酸钠，沉淀DNA时采用异戊醇，还可以增加洗盐的次数；减少每步抽提的损失要注意接近界面时水相的收集，将界面水相转移到一个直径小的离心管中，再进行离心分层后能回收得到更多的水相；如果样品的多糖或粘蛋白含量高，还可采用CTAB这种阳离子表面活性剂代替SDS进行抽提。方法很多，建议你参考Current Protocols
再问：恩我是CTAB-sds结合的方法，明天打算用液氮法，看其结果怎么样，其实ctab是比较经典的方法了。可是土样不一样，就要用不同的试剂和方法，我现在必须要提出DNA，因为若果就这样往下做我觉得会有问题，因为引物有偏嗜性。不过谢谢你了，辛苦了。我的QQ:125622910.希望以后有机会可以向您请教更多的问题。
再答：我电脑上不装QQ，很少上，遗憾。
再问：啊？那您有邮箱吗？
再答：这个账号上留了，看不到吗？
再问：没有的。
再答：不想公开，垃圾邮件太多。
再问：哦这样呀？好吧。只想和您做个朋友。
再答：有问题给我提吧，有时间尽量帮助。

土壤细菌DNA 小弟我提土壤总DNA准备PCR细菌中一种酶的基因,可以半个月过去了,一直P不出来条带,我自己感觉模板存在用传统方法提取土壤基因组DNA,为什么就提不出来呢? 我现在提的DNA的OD值都在1.8左右,含量也在300左右,但是为什么用mix做PCR的时候,做不出来? 我新买了一个铁锅,可是炒出来的菜,很黑啊,到底是怎么回事呢? 眼睛进沙子弄不出来我的眼睛平时进了沙子揉一揉就好了,可是那个东西也没出来 ,这是怎么回事啊会不会对身体有害? 柴油发电机发动机正常!可是发不出来电是怎么回事? 土壤微生物总DNA提取纯化问题为什么我英语单词总是记不住,明明都会背了,可是老师报的时候,我就一个写不出来,这是怎么回事啊蝙蝠白天出来都说蝙蝠白天是在睡觉不出来的..可是我今天下午回家的时候看到好多小蝙蝠在头上飞..这是怎么回事··?..已经英语翻译线粒体叶绿体中的DNA也可以转录翻译吗?可以的话,细胞核有核孔,线粒体和叶绿体的mRNA又是从哪里出来呢? 复制也可以我百不出来电脑打不出来标点符号是怎么回事儿