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为什么我的PCR产物酶切之后什么也没有跑出来?

来源：学生作业帮 编辑：作业帮 分类：语文作业 时间：2024/05/15 07:01:30
为什么我的PCR产物酶切之后什么也没有跑出来?
我的PCR（反应体系25ul）扩增后5ul跑电泳显示出目的基因,然后我用剩下中的10ul和1 0 ×buffer 2 μL ,0.1% BSA 2 μL ,Fok I限制性内切酶( 2U / μL ) 1.25μL ,去离子水补足体积至2 0 μL.3 7 ℃水浴反应1 2 h ,2%的琼脂糖凝胶电泳跑完后得到很浅很浅的两个切开的片段,根本就好像没有,我的DNA都到哪里去了,这是怎么回事?请高手指教,
我好像没有积分 不知道这样有没有人帮我?
我用的EB染色，我看到了切出来的很浅很浅很浅的带，几乎就看不见，原先的目的基因直接电泳特别亮啊，它不是变暗一点点的事。
PCR完了以后不能直接加酶切体系去做酶切.整个体系的离子浓度都不对的.这么切不切碎才怪.老老实实的PCR跑胶回收,或者PCR过柱回收再作酶切.变暗是因为体系不对都被切碎了星号反应.
另外PCR体系请扩大一下,25ul做克隆太少了.至少50ul.
PCR酶跑胶结果mark是连续的,目的条带没有一条跑出来.什么原因.求帮忙 为什么我的RT-PCR内参跑不出来.目的条带到是跑出来了 PCR产物问题如图~第一张是taq酶跑出来的条带~有产物,大小780bp~marker是DL2000而第二次是高保真酶跑 PCR扩增实验之后,产物用琼脂糖凝胶电泳,为什么看不到光带?添加试剂没有问题 PCR过后用3%的琼脂糖 140V的电压跑出来为什么条带不清楚 PCR产物酶切遇到的问题 我跑出来的PCR目的条带很清晰,但是marker很暗,每个加样孔都一样的暗 pcr产物酶切Fermentas公司的内切酶说的PCR产物是质量ug,请问我要怎么样换算成体积ul 本人菜鸟 想问核酸电泳完成后为什么要进行切胶回收?要是没有跑出来为什么也要回收? PCR产物酶切的问题我做的是PCR-RFLP法分析SNP：引物是参照文献设计,takara合成的.订购的是takara的 RT PCR只跑出内参的条带,没有目的基因,原因有哪些? PCR跑出来的条带比较弥散,主要有哪些原因啊?