序列连在T载体上,用sacⅡ单酶切之后目的条带没有了（t载体有）,这是咋回事啊

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：生物作业时间：2024/05/24 16:13:17

序列连在T载体上,用sacⅡ单酶切之后目的条带没有了（t载体有）,这是咋回事啊
序列两端都是sacⅡ酶切位点

将原题贴上,话说的不明不白,我有点无法理解.如果理论上：用用sacⅡ单酶后能出现你的目的条带,但实际上没有酶切出目的条带（t载体有）,我认为原因是T载体自连,你的目的条带没有连上!建议重连,并用菌落PCR检验,然后用酶切检验.
再问：是这样的，我的序列之前连在t载体上，序列长度1800bp，之前已经送过测序没问题的，现在我把连有目的序列的T载体当做质粒从菌体中提了出来，然后做单酶切，因为我的序列两端都带有sacⅡ酶切位点，所以我用sacⅡ对这一质粒进行单酶切，酶切之后发现只有在2700bp左右有很明显的一条带，很明显这是T载体的，而我的目的条带缺不见了。阳性对照为未进行酶切的质粒，可以在4500bp位置看到，说明我的质粒确实带有目的片段的

我的目的片段连载体后,挑单克隆摇菌,用菌液PCR,没有条带. 连接到T载体上面后,做双酶切,条带不正确,目的片段变大是什么原因 pGEM easy-T载体上用的M13引物序列是什么? 我已经有含有目的基因的T质粒了,怎样构建表达载体啊? 关于t载体基因工程中常提到t载体（t-Vector),请问什么是t载体,t载体有什么作用 TAKARA的PMD18-T载体可以用哪个通用引物验证?用了TAKARA的PMD18-T载体转入了目的片段,想用PCR验有没有人反向PCR以后,连到载体上,测序发现：只有引物正确,其它的都不是目的序列在做载体构建的时候,PCR时有目的条带,但是摇菌酶切没有东西,请问是怎么回事啊? 用同种限制酶切质粒和目的基因DNA,连接后,产生的载体-载体连接物不是也有标记基因而且在培养基上生长吗我构建的穿梭载体,连接好后进行双酶切和PCR两个途径的检测,结果酶切没有条带显示,而PCR确有目的条带! T载体克隆为什么要用cDNA 怎么单酶切,单酶切后怎么把目的基因连到已经酶切过的载体上如何防止自连