用pet32a构建表达载体,目的片段是220bp左右,酶切是ecor1和hindlll,但酶切连接转菌提质粒后却只有20

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：综合作业时间：2024/05/04 06:34:04

用pet32a构建表达载体,目的片段是220bp左右,酶切是ecor1和hindlll,但酶切连接转菌提质粒后却只有2000bp
做过pcr验证有目的条带,想不明白是为什么.2个月了,求救

把提到的质粒,双酶切,跑胶,看看是不是2条带,1条200多,1条5000多.如果是,就没问题,不用纠结了.如果不是,那你的质粒有问题.
再问：提到的空载pet32a质粒跑胶是5000多，但是酶切连接转菌提质粒后再跑胶就变成了2000多。这是质粒的问题吗
再答：把构建好的质粒，双酶切，去跑胶，看看。如果是对的话，那就应该在220和5900 附近只有这2条带。线性的状态，bp数会比较准些。

我的目的片段连T载体后,挑单克隆摇菌,用菌液PCR能P出目的片段,再提质粒用Ecor1做酶切,片段变小怎么回目的片段转入表达载体后我用什么方法可以检测我的目的质粒? 提取的质粒跑电泳出来带很杂,目的片段1700bp,用的是pMD19—T载体,从左往右第三泳道和第九泳道是空质粒在构建基因表达载体时候,怎么利用选择培养基鉴别是质粒—质粒,目的基因—目的基因,还是质粒—目的基因请问表达蛋白时对载体质粒有要求吗,我要做原核表达,现有很多质粒可作为载体,如PET32a和PGEX4t-1,如何选构建基因表达载体时,启动子终止子是如何设计加上去的?通常说用同一种酶切割质粒和目的基因,这样可以保证连接,但是目的基因前可以用构建好的插入了目的基因的表达载体重组质粒做southern吗在基因表达构建载体中什么切割质粒什么切割目的基因,为什么? 我已经有含有目的基因的T质粒了,怎样构建表达载体啊? 我进行的是原核蛋白表达,表达载体是PET32a,表达菌液超声后在上清电泳条带很好,可是没有酶活为什么我的目的基因连接克隆载体转化、提质粒后,酶切鉴定正确,而质粒PCR和菌液PCR鉴定都不正确呢?着急请问什么是穿梭质粒载体和表达质粒载体?