自己设计比较完美的引物有个别扩增不出来目的片段或者扩增不够理想,请问是什么原因?有什么方法解决?

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：综合作业时间：2024/05/16 17:43:09

自己设计比较完美的引物有个别扩增不出来目的片段或者扩增不够理想,请问是什么原因?有什么方法解决?
做梯度PCR也没什么效果,请问该怎么解决?

“自己设计比较完美的引物”……怎么个完美法?GC值?Tm值?hairpin?dimer?
扩的是质粒还是基因组?片段多长?BLAST过没?
虽然我不一定能帮您解答,但为了别人能回答,还是请你补充一下~
再问：非常感谢你们帮我解决难题，我现在想找到扩增失败可能的原因，下次尽量避免。引物TM值上游56.2，下游54.2；GC含量上游47.6，下游45.0；引物之间均有两个相邻碱基互补配对，一种情况3‘端参与，一种情况在中间，两种情况不同时出现。下游引物发卡结构也不严重且发生在5’端，所有特殊结构自由能绝对值均小于4.5。另外我扩增的是基因组。OLIGO推荐退火温度51.9，可是做了梯度发现没什么明显效果，还是扩不出来。
再答：扩增片段多长？扩出来是什么样子的？是什么都没有还是有很多非特异性条带？
再问：片段大小300bp，扩出来的都是类似引物二聚体的样子，小于100bp；
再答：先确认下DNA和酶的质量，然后降低退火温度和换长片段PCR的酶试试。再不出来，就再设计引物，将基因分成两段来P。哦对了，记得BLAST。

组织提取的cDNA和细胞提取的cDNA用同一引物PCR扩增出来的条带长度不一样,是什么原因?有什么方法改进吗 PCR技术扩增目的基因中的引物有什么作用? 关于引物和目的基因的关系.针对某基因设计的同一对引物在不同人的基因组中扩增的片段一定一样吗 PCR引物设计问题如果我设计的引物,扩增出来的目的片段长度为200BP,但是石蜡包埋组织提取出来的DNA模板大多数在10 引物是否只是PCR扩增中的目标链,它与扩增产生的DNA链序列有什么区别? 我想问根据同一个基因设计的两个引物,都在小麦中扩增,扩增片段大小是否一样? PCR扩增不出就引物有问题吗? 已知一个基因的mRNA和cDNA,我想克隆此基因,进行转染表达,但是设计的引物无法扩增出目的片段……急求! RNA反转录后,分别用内参引物和目的基因引物扩增,目标基因有条带,内参没有扩出来,问题可能处在什么地方特异引物PCR问题各位大牛,小弟初涉分子生物实验,最近在用设计好的特异性引物扩增保守序列,可是总也是扩增不出来,常常是只基因组PCR扩增条带很宽可能的是什么原因?有哪些可以解决的方案?（连续几次实验做出来的条带都比较宽）我想扩增某一目的基因,请问引物一定要在起始密码子和终止密码子周围设计吗?