在测序前如何进行pcr产物的酶切纯化,注意我想知道的是用于测序的pcr产物酶切纯化,不是用于克隆的酶切.

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：生物作业时间：2024/05/15 09:10:50

这种方法有比较大的局限性,要求pcr产物条带要单一,如果有杂带的话测序结果肯定就是一堆的套峰了.
这种方法是采用虾碱酶（SAP,Shrimp Alkaline Phosphatase）和外切酶I的混合溶液,来消化pcr扩增体系中多余的dNTPs和引物,以便后面的测序.一般使用的终浓度为1ul混合溶液中,含有虾碱酶0.6单位,外切酶I1.2个单位,这个比例也可以自己通过试验来调整.
一般是1ulpcr产物加2ul溶液.37度孵育15分钟,即可除去多余的引物以及dNTPs,然后80度,15分钟就可以使虾碱酶失活.
这个方法的优点是简单、快速、省钱、不损失样品,缺点是对样品要求高,如果一次纯化测序结果不好还要重来,费时费力.所以现在测序公司一般都是使用胶回收试剂盒来纯化,这样虽然工作量比较大,费钱,但基本可以保证一次成功,总体看来还是省时省力的.

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