作业帮辣根过氧化物酶试剂的配制方法?
来源：学生作业帮 编辑：作业帮 分类：生物作业 时间：2024/05/10 19:30:01
辣根过氧化物酶试剂的配制方法?
需要在大鼠头部做神经追踪,请问辣根过氧化物酶要配制成什么样的试剂（用水还是其他什么溶剂来做）?请懂的朋友给与指导,
需要在大鼠头部做神经追踪,请问辣根过氧化物酶要配制成什么样的试剂（用水还是其他什么溶剂来做）?请懂的朋友给与指导,
物范围较广,包括二氨基联苯胺（DAB）、氯萘酚和氨乙基咔唑等.
二氨基联苯胺／金属盐
DAB是辣根过氧化物酶最敏感、常用的底物.它产生强烈的棕色产物,在水和醇中不溶解.多数情况下,推荐在DAB中加入不同的金属离子.当加入金属盐如钴、镍至底物液中,辣根过氧化物酶可以更加敏感.此类反应产物呈暗蓝灰色至黑色,且在水及醇中稳定.DAB／金属盐染色应用的组织染色范围较广.
1．需要的溶液和特殊设备
DAB,0．05mol／LTris缓冲液（pH7．6）；
0．3％（W／V）氯化镍／水贮存液；
30％过氧化氢；
DPX.
光学显微镜（通常带有照相机以便于记录结果）
2．操作步骤
（1）用9ml 0．05mol／LTris缓冲液（pH7．6）溶解6mgDAB；
（2）加lml0．3％（W／V）氯化镍／水贮存液（也可以用等量的氯化钴替代）；
（3）加0．1 m1 3％过氧化氢.过氧化氢一般以30％的溶液提供,贮存在4E,此条件可以持续1个月；
（4）如果出现沉淀,用滤纸过滤；
（5）加此溶液至标本,并孵育1—20min水洗终止反应；
（6）优化：如果需要可复染；
（7）用DPX封片.
氯萘酚
氯萘酚可以形成一种蓝黑色产物.敏感性低于DAB,且产物可溶于醇中.它适用于当DAB反应形成较高背景或要求改变产物的颜色.
1.需要的溶液和特殊设备
0,03％氯萘酚,用无水乙醇溶解（贮存在-20℃）,0．05mol／LTris（pH7．6）
过氧化氢；
Gelvatol或者Mowiol.
光学显微镜（通常带有照相机以便于记录结果）.
2．操作步骤
（1）氯萘酚贮存液的准备：用10ml无水乙醇溶解0．3g氯萘酚,贮存于—20℃；
（2）加100ul氯萘酚贮存液至10ml 0．05mol／LTris（pH7．6）,
（3）加0．1ml 3％过氧化氢于水中.过氧化氢一般是以30％的溶液提供,4℃可存放1个月；
（4）白色沉淀可用滤纸过滤去除；
（5）加此溶液到标本中,并在室温孵育10～40min,水洗终止反应；
（6）优化：如果需要,进行复染,但只可使用水溶性染料；
（7）用Gelvatol或者Mowiol封片.
氨乙基咔唑
氨乙基咔唑（AEC）产生红色产物,其敏感性低于DAB,但可用于DAB反应产生较高背景或要求改变产物颜色的试验.此产物可溶于醇,但不溶于水.
1．需要的溶液和特殊设备
0．4％AEC用N,N—二甲基甲酰胺（DMF）溶解；
0．1mol／L乙酸钠缓冲液（pH5．2）；
过氧化氢；
Gelvatol或Mowi01．
光学显微镜（通常带有照相机以便于记录结果）.
2．操作步骤
（1）用lmlDMF溶解4mgAEC.AEC在DMF中稳定,因此,可以用100mlDMF溶解0．4gAEC作为贮存液备用；
（2）加lmlAEC溶液至15ml 0．1mol／L的乙酸钠缓冲液（pH5．2）中,并搅拌；
（3）加0．15ml 3％过氧化氢于水中.过氧化氢一般是30％的溶液提供,在4℃可存放1个月；
（4）用滤纸过滤；
（5）加此溶液到标本中,并于室温孵育10～40min,水洗终止反应；
（6）优化：如果需要复染,只可用水溶性染料；
（7）用Gelvatol或Mowiol封片.
二氨基联苯胺／金属盐
DAB是辣根过氧化物酶最敏感、常用的底物.它产生强烈的棕色产物,在水和醇中不溶解.多数情况下,推荐在DAB中加入不同的金属离子.当加入金属盐如钴、镍至底物液中,辣根过氧化物酶可以更加敏感.此类反应产物呈暗蓝灰色至黑色,且在水及醇中稳定.DAB／金属盐染色应用的组织染色范围较广.
1．需要的溶液和特殊设备
DAB,0．05mol／LTris缓冲液（pH7．6）；
0．3％（W／V）氯化镍／水贮存液；
30％过氧化氢；
DPX.
光学显微镜（通常带有照相机以便于记录结果）
2．操作步骤
（1）用9ml 0．05mol／LTris缓冲液（pH7．6）溶解6mgDAB；
（2）加lml0．3％（W／V）氯化镍／水贮存液（也可以用等量的氯化钴替代）；
（3）加0．1 m1 3％过氧化氢.过氧化氢一般以30％的溶液提供,贮存在4E,此条件可以持续1个月；
（4）如果出现沉淀,用滤纸过滤；
（5）加此溶液至标本,并孵育1—20min水洗终止反应；
（6）优化：如果需要可复染；
（7）用DPX封片.
氯萘酚
氯萘酚可以形成一种蓝黑色产物.敏感性低于DAB,且产物可溶于醇中.它适用于当DAB反应形成较高背景或要求改变产物的颜色.
1.需要的溶液和特殊设备
0,03％氯萘酚,用无水乙醇溶解（贮存在-20℃）,0．05mol／LTris（pH7．6）
过氧化氢；
Gelvatol或者Mowiol.
光学显微镜（通常带有照相机以便于记录结果）.
2．操作步骤
（1）氯萘酚贮存液的准备：用10ml无水乙醇溶解0．3g氯萘酚,贮存于—20℃；
（2）加100ul氯萘酚贮存液至10ml 0．05mol／LTris（pH7．6）,
（3）加0．1ml 3％过氧化氢于水中.过氧化氢一般是以30％的溶液提供,4℃可存放1个月；
（4）白色沉淀可用滤纸过滤去除；
（5）加此溶液到标本中,并在室温孵育10～40min,水洗终止反应；
（6）优化：如果需要,进行复染,但只可使用水溶性染料；
（7）用Gelvatol或者Mowiol封片.
氨乙基咔唑
氨乙基咔唑（AEC）产生红色产物,其敏感性低于DAB,但可用于DAB反应产生较高背景或要求改变产物颜色的试验.此产物可溶于醇,但不溶于水.
1．需要的溶液和特殊设备
0．4％AEC用N,N—二甲基甲酰胺（DMF）溶解；
0．1mol／L乙酸钠缓冲液（pH5．2）；
过氧化氢；
Gelvatol或Mowi01．
光学显微镜（通常带有照相机以便于记录结果）.
2．操作步骤
（1）用lmlDMF溶解4mgAEC.AEC在DMF中稳定,因此,可以用100mlDMF溶解0．4gAEC作为贮存液备用；
（2）加lmlAEC溶液至15ml 0．1mol／L的乙酸钠缓冲液（pH5．2）中,并搅拌；
（3）加0．15ml 3％过氧化氢于水中.过氧化氢一般是30％的溶液提供,在4℃可存放1个月；
（4）用滤纸过滤；
（5）加此溶液到标本中,并于室温孵育10～40min,水洗终止反应；
（6）优化：如果需要复染,只可用水溶性染料；
（7）用Gelvatol或Mowiol封片.