作业帮色谱分离原理?
来源：学生作业帮 编辑：作业帮 分类：生物作业 时间：2024/05/03 07:35:20
色谱分离原理?
按色谱法分离所依据的物理或物理化学性质的不同,又可将其分为：
吸附色谱法：利用吸附剂表面对不同组分物理吸附性能的差别而使之分离的色谱法称为吸附色谱法.适于分离不同种类的化合物(例如,分离醇类与芳香烃).
分配色谱法：利用固定液对不同组分分配性能的差别而使之分离的色谱法称为分配色谱法.
离子交换色谱法：利用离子交换原理和液相色谱技术的结合来测定溶液中阳离子和阴离子的一种分离分析方法,利用被分离组分与固定相之间发生离子交换的能力差异来实现分离.离子交换色谱主要是用来分离离子或可离解的化合物.它不仅广泛地应用于无机离子的分离,而且广泛地应用于有机和生物物质,如氨基酸、核酸、蛋白质等的分离.
尺寸排阻色谱法：是按分子大小顺序进行分离的一种色谱方法,体积大的分子不能渗透到凝胶孔穴中去而被排阻,较早的淋洗出来；中等体积的分子部分渗透；小分子可完全渗透入内,最后洗出色谱柱.这样,样品分子基本按其分子大小先后排阻,从柱中流出.被广泛应用于大分子分级,即用来分析大分子物质相对分子质量的分布.
亲和色谱法：相互间具有高度特异亲和性的二种物质之一作为固定相,利用与固定相不同程度的亲和性,使成分与杂质分离的色谱法.例如利用酶与基质(或抑制剂)、抗原与抗体,激素与受体、外源凝集素与多糖类及核酸的碱基对等之间的专一的相互作用,使相互作用物质之一方与不溶性担体形成共价结合化合物,用来作为层析用固定相,将另一方从复杂的混合物中选择可逆地截获,达到纯化的目的.可用于分离活体高分子物质、过滤性病毒及细胞.或用于对特异的相互作用进行研究.
吸附色谱利用固定相吸附中心对物质分子吸附能力的差异实现对混合物的分离,吸附色谱的色谱过程是流动相分子与物质分子竞争固定相吸附中心的过程
吸附色谱的分配系数表达式如下：
K_a =\frac
其中[Xa]表示被吸附于固定相活性中心的组分分子含量,[Xm]表示游离于流动相中的组分分子含量.分配系数对于计算待分离物质组分的保留时间有很重要的意义.
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尺寸排阻色谱法：是按分子大小顺序进行分离的一种色谱方法,体积大的分子不能渗透到凝胶孔穴中去而被排阻,较早的淋洗出来；中等体积的分子部分渗透；小分子可完全渗透入内,最后洗出色谱柱.这样,样品分子基本按其分子大小先后排阻,从柱中流出.被广泛应用于大分子分级,即用来分析大分子物质相对分子质量的分布.
亲和色谱法：相互间具有高度特异亲和性的二种物质之一作为固定相,利用与固定相不同程度的亲和性,使成分与杂质分离的色谱法.例如利用酶与基质(或抑制剂)、抗原与抗体,激素与受体、外源凝集素与多糖类及核酸的碱基对等之间的专一的相互作用,使相互作用物质之一方与不溶性担体形成共价结合化合物,用来作为层析用固定相,将另一方从复杂的混合物中选择可逆地截获,达到纯化的目的.可用于分离活体高分子物质、过滤性病毒及细胞.或用于对特异的相互作用进行研究.
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