作业帮PCR溶解曲线-探针法
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/05/22 07:27:55
1,检查引物探针的特异性等2.检查所用模板质量数据核查的话主要看你所测得的数据是否跟你的理想状态差距很大,或数据是否符合常理.再就是看数据得看下相关系数和扩增效率.
这个不同的基因Taqman的探针不一样,它不是通用的,是专一性的,是某个基因的某段序列.然后你选一段小的位置来做为探针,两端分别加上发光基团与淬灭基团,正常情况下他们不发出信号,在PCR扩增的时候他就
这个一般是用SYBYGreen作为荧光染料的时候需要做的工作!因为SYBYGreen染料是非特异的染料,只要有扩增,染料就可以镶嵌在双链中发出荧光.我们做溶解曲线是为了观察我们扩增发出荧光的片段是不是
博凌科为-为你是的,每个基因都要有自己的梯度稀释的标准品,而且每次都要和样品一起PCR.不同的基因如果反应条件一样就可以一起作,但标准品不通用.
有的可以通用,但是大多数的时候不能,需要重新设计,我公司可以带你设计引物,如果在我公司订购试剂,可以免费设计,南京骥骜生物,电话：025-84865584,
在设置反应程序时,在最后加一步
使用引物设计软件,如果可以最好找公司设计合成,这样有保证.再问：老师要我们自己设计啦···杯具··再答：挺有难度，到网站上找一些设计原则看看。再问：谢谢啦，已经搞定啦··
用SyberGreen方法做完PCR后,用来判断产物是否相对专一.反应结束后,逐渐加温.和SyberGreen分子结合的PCR产物随温度升高逐渐变为单链,就不能在和SyberGreen结合.一般每加温
溶解曲线分析可以用来确定不同的反应产物,包括非特异性产物.扩增反应完成后,通过逐渐增加温度同时监测每一步的荧光信号来产生溶解曲线,随着反应中双链DNA变性,荧光染料又回复到游离状态导致荧光信号降低,用
可以看看有几个峰,以及峰出现的位置.每个峰代表有一种产物,如果有两个峰甚至多个峰,说明引物不特异,你得到的Ct值是不可信的.还有如果出现峰的温度低,很可能是Dimer,而不是你的目的产物.如果你相同样
如果扩增产物只有目标序列的话就应该只有一个峰的.1.简单的说来,溶解曲线就是在采用荧光染料法进行实时定量PCR时采用的一种分析手段.当体系的温度逐渐升高的时候,体系中的PCR产物慢慢的由双链变成单链,
不需要完全符合等差数列的.你说说看相关系数R2和扩增效率E的结果怎么样,之后再考虑调整体系和qPCR程序.
一个峰不会出现2条带可能是另一个峰很不明显我遇到过很细微的峰也能跑出带来你再检查下溶解曲线
溶解曲线是在正常的PCR反应基础上加一个溶解曲线的反应条件,其中当温度由60℃升至95℃时,PCR仪每隔一定的温度检测一次信号.最后将收集的信号绘制出溶解曲线,然后将溶解曲线一次微分就会得到我们平时看
实时定量PCR是通过产物发出荧光,根据荧光强度来定量的.激发荧光的方式有荧光染料法和探针法.荧光探针比荧光染料更具特异性,可检测特定序列的扩增产物的量.荧光染料可以检测PCR中获得的全部双链DNA,但
引物特异性不好,或者是模板有污染吧.
染料法的?大概引物特异性不好,有杂带或者二聚体,把反应板里的样跑个胶看看是不是,是的话就换引物吧
PCR扩增引物要在目的片段两测150bp位置为宜,这样设计的原因是既可以有效控制扩增产物的大小,因为太长的片读一个测序反应无法得到全场序列,又可以给测序设计内引物留出足够的空间.由PCR特性决定的,不
就是一小段目的基因序列,确定序列以后找公司合成就行了
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