pcr条带越亮说明

建议：循环次数减少3,Mg离子浓度降低到1.2mm,提高annealing的温度

如果实验目的只是基因型鉴定,对PCR产物无其他要求的话,二聚体并非不能忍受,可以尝试以下方法优化反应条件：1.确定DNA模板为阳性,即确定含有目标序列；2.对退火温度设置温度梯度,琼脂糖电泳检测是否有

存在两种可能性,第一,引物设计错误,可以将引物和参考序列进行拼接后看看能不能顺利拼接,以及拼接之后的目的片段长度；第二,可能是非特异扩增,这个时侯如果确定引物位置没有问题,可以调整退火温度,以及PCR

可能是水污染了,另外还有你操作及操作环境的原因.建议ddH2O灭菌后分装到2ml离心管放入-20°备用,每次用一管如果容易污染的话,建议你到超净台中操作PCR过程

上下引物的Tm最好相似,不能差异太大,不然不好设计退火温度；内参条带很亮,说明RT应该没多大问题,问题可能出现在PCR上.没有目的基因是因为1该基因确实不表达；2你的引物不特意,到NCBI的Prime

1.引物设计不够特异,检查你的序列,去BLAST看看.2.退火温度过低,检查你的引物的Tm,检查你的程序设置.

在PCR的优化开始阶段,应用新的DNA模板,引物或热稳定DNA聚合酶等材料建立的PCR方法,其扩增效果一般总不是最佳的.这种PCR反应通常要求尽量抑制非特异性扩增和（或）增加目的DNA产物的产率.表1

可以照胶的时候去调节亮度,对比和γ射线,然后会清楚一些.同时,你优化下PCR扩增条件之类的,提高扩增效率.希望对你有帮助.望采纳.再问：感谢回答，我会试试调节亮度。请问，这跟电泳时使用的染色液有关系吗

就只是你的目的基因菌液PCR扩增不出来么?不过我觉得你如果质粒、电泳、菌落PCR都能验证的话,菌液PCR结果如何都意义不大了.

另一条带在目的条带的上边且比较模糊的话,可能是引物二聚体,如果另一条也很明亮狭窄的话,估计是引物有错配.

1.先看下PCR电泳图里杂带多不多,若有的话很可能非特异性扩增了2.若条带干净,仍然有可能存在非特异性扩增,引物特异性不高导致竞争结合可将DNA直接酶切看是否能切出你的目标片段3.序列比对结果不能只看

恐怕还是cDNA的问题,actin因为量比较丰富,所以即使破坏一些仍能P出来,但你的目的基因就不同了

主带显著的情况下,很可能是引物聚合体.如果没有出现显著的你想要的主带,则是非特异扩增产物.第一种情况没事不用理会,第二种情况需要筛查模版中与引物的非特异性互补区,重新设计引物,或者升高退火温度试试.

首先要看你的条带是否清晰,虽然亮度不够但是清晰度应该高,没有拖尾没有非特异条带和引物二聚体,如果以上都没有,仅仅是目标条带不够亮的话,我觉得你可以将25微升体积同比放大至50微升反应体系,相应的制胶的

“从头拖到尾,另外一对引物就能做出来”说明不是引物之间形成二聚体,而是第一对引物的设计有问题（特异性很差）.如果一定要扩增那个区,建议引物的位置向两边放一放.如果你没有好的设计软件,建议到Primer

出现非特异性扩增带PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致,或大或小,或者同时出现特异性扩增带与非特异性扩增带.非特异性条带的出现,其原因：一是引物与靶序列不完全互补、或引物聚合形成二聚体.二是Mg2

PCR条带不够亮,说明扩增效率不高.一方面可能是你的引物设计的不够好,导致扩增效率低；二是引物的退火温度,你可以做个温度梯度PCR摸索下最佳退火温度,这样可以提高引物扩增效率.三是,DNA模板,浓度过

PCR扩增的结果和模板的质量有直接的关系,在PCR扩增中如果模板纯度高,很低的量都可以进行扩增的.提取细菌的DNA量不多但纯度高,即使DNA电泳检测不到条带,PCR仍然能扩出条带.希望你看明白了.

开始我以为是退火温度问题,但是你说做了两次,第一次没有条带,第二次有一条没有,这说明你加样有问题,还有你为什么要同一个cDNA要做六个PCR呢?还是lz说的不清楚?同样的条件同样的样品没理由会六条中只

1退火温度不合适2引物不合适3模板有问题4酶由问题