pcr产物放置一个星期后跑电泳弱带不见了
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/05/12 12:10:49
有时候溶解曲线看上去是很特异的,而电泳却能跑出两条带;加内参是为了做表达比对,跟内参比,这样才能知道是高表达还是地表达,也可以作为判断PCR反应过程是否顺利的依据.
个人觉得有几个原因:1.可能凝胶没有融化好,里面有小颗粒.2.胶没有完全凝固就拔梳子和跑电泳.3.梳子没洗干净,上面可能有脏东西污染了样品孔;4.DNA稍微有点多,用一半量应该可以了.5.电泳电压有点
当然可以的.
你的没个样品都应该有个内参基因来对照.这样才有意义
600是多在中间,还是加在一头?其他的序列还一样吗?说具体一些如果是在中间,扩增的是cDNA的话,有可能是mRNA的alternativesplicing
如何做米酒将糯米淘洗干净,用冷水泡4-5小时,笼屉上放干净的屉布,将米直接放在屉布上蒸熟.因米已经过浸泡,已经涨了,不需要象蒸饭那样,在饭盆里加水.蒸熟的米放在干净的盆里,待温度降到30-40度时,拌
带电颗粒在电场作用下,向着与其电性相反的电极移动,称为电泳(electrophoresis,EP).利用带电粒子在电场中移动速度不同而达到分离的技术称为电泳技术.1937年瑞典学者A.W.K.蒂塞利乌
一般当天跑而已最多也就在冰箱放过两天再久不知道有没有影响了再问:我还想问一下,5倍的电极缓冲液是用的时候稀释五倍吗?五倍的上样缓冲液呢?再答:电极缓冲液用的时候稀释上样缓冲液就是混到样品里最终体积是该
是不是接触不良,中间通电不好?说明你的样根本就没开始跑孔不小心穿通了,会影响跑的距离,结果不准确
不建议这么做,pcr产物的话大部分的都会降解的,我有一次把pcr产物放在-20度里四天都有降解的情况.建议跑胶回收纯化后保存.
若是普通PCR,做完以后要通过电泳鉴定目的片段的大小是否为想要的,条带的亮度可以反映模板的两是否足够,也可以看是否存在引物二聚体,借此优化PCR条件和体系若是RealTimePCR,尽管可以直接看显示
可能PCR反应进行的不好,没有得到充足的DNA片段建议改善反应条件,重做一便.
首先看你的MARK亮不亮,如果MARK不亮的话说明EB少了,多加点EB.如果MARK亮的话,那就是你的PCR产物浓度不够,这个就原因多了1、增加引物浓度2、增加PCR循环数3、降低PCR退火温度以提高
cDNA一般是不检测的,并且也不好检测,因为你的cDNA都是mRNA,电泳出来会是一条弥散的带.并且上样量需要较大才能看间.需要检测的是提取的RNA,看是否28s和18srRNA是否清晰、明显(二者位
如果你切的是PCR产物的两端,那么跑胶是看不出来区别的.选择这样只是因为方便,酶切的效率要取决于保护碱基、酶的质量等等,一般根据经验切完之后,挖胶回收,如果产物带很特异的话,直接PCR产物回收也可以(
电泳的目的是看DNA片段的长度,而电泳上DNA移动速度除了受片段长度的影响还受到其结构的影响.让DNA变性,所有样品都是线形DNA.这时所有电泳上所有DNA的移动速度只和其长度有关.
PRC跑不出来先考虑是不是模板的问题,是不是DNA没有抽出来,可以把抽出来的东西跑个胶看一看.如果抽出来了,但是PCR没跑出来,就把模板浓度降低一下;如果DNA没跑出来,就要从抽提步骤上找问题.你们用
现在PCR用的Taq酶只能以DNA为模板,不能以RNA为模板.所以你不能用RNA代替cDNA.再问:但是我用RNA代替cDNA,结果很多基因都扩增出来了,难道说我提的RNA全部污染了DNA。再答:
试剂盒应该没有问题,因为不久前还用,都提出来了.而且因为提不出来,就PRC跑不出来先考虑是不是模板的问题,是不是DNA没有抽出来,可以把抽出来再问:我提出来的DNA杂质太多,PCR过后电泳,拖尾现象严
用dl2000marker的话,在750bp(从上往下第三条带)和1000bp(第四条带)之间,