设计引物应该以含ATG的链为模板吗

不需要只要你扩增出来的包含了该基因的完整CDS序列上面有起始密码子和终止密码子再问：多谢你的回答。我没有表达清楚我的意思。我是从一段基因上118-600碱基的位置，扩增目的基因，这一段基因没有起始密码

引物的设计一般要考虑以下几个问题：1.长度,至少要16bp,通常为18-30bp2.解链温度（Tm值）3.避免引物内部或引物之间存在互补序列（3个碱基）,从而减少引物二聚体的形成以及引物内部二级结构的

请用primerexpress设计就行.你想去找非常保守的区域设计引物?可以,那你把这个物种的所有亚种的此段DNA序列做一个保守型分析就行.一般来说clustalX就可以了.再问：ClustalX排列

只能两头设计你不知道基因名字么实在不行拿序列去BLAST上比对下也能知道它前后是啥啦

引物设计原则：1、长度：15—30bp,其有效长度[Ln=2(G十C)十(A十T)]一般不大于38,否则PCR的最适延伸温度会超过Taq酶的最佳作用温度(74度),从而降低产物的特异性.2、G十c含量

您应该使用巢式PCR来做这个实验.无论您是先提RNA再做反转录,还是直接从DNA中获得基因,考虑到模板的复杂性,都应当使用巢式PCR.建议您先从目的基因的上下游设计一段引物,即外引物,再根据目的基因上

如果该ATG是翻译起始位点,就没有蛋白翻译了.如果是inframe编码,就会少一个氨基酸再问：少了一个蛋氨酸，我的蛋白就是残缺肽了。。。那样子做相互作用会有影响吗？如果有结果了，实验数据可靠不？再答：

PCR引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段,使其能有效地扩增模板DNA序列.因此,引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否.要设计引物首先要找到DNA序列的保守区.同时应预测将要扩增的片段

cDNA再问：真核基因转染其他细胞时一般选择表达DNA还是mRNA?再答：转进去的是DNA。整合到受体基因，表达mRNA再问：那你研究某一基因时，若需克隆你是不是一般以DNA序列设计引物啊？若是以mR

cDNA和mRNA的序列是互补的,如果用两个引物,最后的两条DNA序列分别对应于mRNA和cDNA中的一段.由于引物方向从5‘至3’,所以两个引物对应于mRNA和cDNA中相应序列即可.

跟一般的PCR一样哇,PrimerPremier、Oligo都可以哦.

我从来都是根据它的mRNA序列来设计引物的,如果你是用来构建靶基因的表达载体的话,你插入的启动子的后面序列肯定得是你的编码链而不是模板链,如果你只是用来定量或者测序的话个人觉得没什么区别再问：如果用哪

和从哪设计引物没关系如果编码区有突变的话那就肯定不行的最简单的就是拿去测序CDS区完全正确就可以了验证功能的话就做western以及检测该基因下游targets的表达量比如它可以促进A的表达就转染细胞

一般使用primer5就挺好,不知道你是扩基因还是启动子,基因是否是已知.PCR引物设计原理:PCR引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段,使其能有效地扩增模板DNA序列.因此,引物的优劣直接关

不,需要两条,因为随着你PCR的进行,另一条互补链会被引物扩增出来,因此你需要两条引物都加进去.再问：那么我引物设计的时候，是不是以mRNA为模版与以CDNA为模版设计的引物都可以？再答：都可以，别忘

克隆基因的编码框时,必须从ATG开始或UTR处开始.当你想表达这个基因时,PCR产物必须包括完整的读码框；当你需要该基因融合GFP时,不仅需要从ATG开始,终止密码子必须突变掉,而且目的基因与GFP必

设计引物应遵循以下原则：　　①引物长度：15-30bp,常用为20bp左右.　　②引物扩增跨度：以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段.　　③引物碱基：G+C含量以40-60%为

我觉得不用吧计算Tm和退火不是算的双链部分的嘛不用计算附加碱基,如果要调整PCR的特异性,只是提高退火温度就好了,这个提高不是以附加碱基为基础的.克隆实验倒是无所谓,如果你是要在附加碱基中加入一个小T

引物以碱基为单位,常用的是18-27bp,但不应大于38,不同公司的产品价格不一样,推荐使用宝生物的（价格比较合理）.

应该是对的.因为G或C能互补配对形成3个氢键,所以结合会更加牢固.