设计flag标签进行免疫共沉淀

BUFFER不贵,贵的是抗体和珠子,抗体按2UG一管算,珠子5ML4000+每次用量70-80UL一管（免疫清洗+正式试验）,珠子可以回收抗体不行,加上后面的DNA纯化,如果需要的话,再加上REAL-

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应该可以做了的,我做动物的组织,一次实验的用量才几十mg,有看到论坛里有人说最少10-20mg就可以做了呢

看你的flag抗体是否有问题,我是做抗体生产的,原来开发flag抗体时就会对其进行C端、N端、M端的Qc检测,正常情况下三端都需要有识别,我担心你的抗flag抗体有可能不识别N端,还有一种可能就是你的

用GST标签把X蛋白结合到层析柱上,血清用这个柱子亲和层析.

染色体免疫共沉淀（ChromatinImmunoprecipitation,ChIP）是基于体内分析发展起来的方法,也称结合位点分析法,在过去十年已经成为表观遗传信息研究的主要方法.这项技术帮助研究者

利用识别特定蛋白的抗体,捕获与此蛋白相互作用的核酸.特定蛋白多半是能够与核酸结合的,转录因子,调控原件等等,而抗体可以是识别不同修饰的蛋白,例如乙酰化什么的,用于转录调控,表观遗传学研究等等抗体挂到固

真核生物的基因组DNA以染色质的形式存在.因此,研究蛋白质与DNA在染色质环境下的相互作用是阐明真核生物基因表达机制的基本途径.染色质免疫沉淀技术（chromatinimmunoprecipitati

细胞内有许多调节机制都是通过蛋白质的转录后修饰、蛋白质之间的相互作用、蛋白质与DNA间的相互作用等瞬时又严谨的变化来实现的.甲醛作为固定剂．就好比是染色质瞬时事件的摄相机,免疫沉淀又能通过合适抗体的选

染色质免疫沉淀（ChIP）实验指南及技术总结ChIP是一项比较流行的研究转录因子（transcriptionfactor,TF）与启动子（promoter）相互结合的实验技术.由于ChIP采用甲醛固定

如果已知目标蛋白是什么,只要做WB就可以看了如果未知目标蛋白是什么,则需要根据与阴性对照的结果对比来判断.也就是没有加抗体,只有beads和蛋白孵育的对照组没有这个条带,而实验组有,才能说明是抗体特异

不需要.或者说需要你分开一个个证明.用一个抗体去做IP,然后分别用3个抗体做IB,看你抓下的蛋白是否是3个蛋白复合物

我如果分别去测ILK,AKT的磷酸化水平,就可以知道他们的激活程度了,还有必要做免疫共沉淀吗?免疫共沉淀的结果是提示ILK/AKT结合在一起的水平有多高,但是结合也就意味着磷酸化,似乎两者做出的结果提

Protocol见链接,和蛋白-蛋白的免疫共沉淀差不多,主要是要小心避免RNA降解

可能你是两个概念,应该说的是IP和pulldown,两者都是用蛋白来拉蛋白.IP是拉与目标蛋白互做的蛋白质,但是这个互做是保持了细胞内生物学状态,就是说更接近真实状态.pulldown就是拉目的蛋白质

你CO-IP的目的不是要目的蛋白么GFP这种外源的一半不会和体内的蛋白相互作用但是即使作用了你要的目的蛋白肯定会下来管它其他的蛋白下不下来呢

都是用来研究蛋白质相互作用的技术免疫共沉淀的话蛋白质是处于天然状态,蛋白质的相互作用可以在天然状态下进行,可以避免认为影响,还可以分离得到天然状态下相互作用的蛋白复合体.但是问题是两种蛋白质的结合可能

GSTpull-down一般指用一个带GST标签的重组蛋白,与目的蛋白进行孵育,最后用结合GST的Beads拉下相互作用复合物.免疫共沉淀一般是用某一蛋白的抗体,在细胞裂解液中与相应的蛋白结果,用Pr

分别取少量物质加入到小试管中再加入少量二氧化锰用带一个到气管的单孔胶塞塞好保证不漏气将另一段放入水中可以持续放出大量气泡的就是氯酸钾另外的一个是氯化钾（其实就是用制氧气的方法区别）

主要是看蛋白互相结合的啊,检测表达用western就可以