细胞系DNA提取 浓度很低为什么? 白色絮状沉淀漂浮不贴壁为什么?
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/05/22 03:43:38
真是牛人啊~没加沉淀剂吧?
灭菌的目的是为了防止菌体DNA的污染,当然也只是排除了耗材来源的外来菌种污染而已,空气中还有材料本身所带的菌种是无法去除的,那么问题的关键就在于你拿到目的基因组的下游要进行什么操作了,如果污染对下游没
因为t4dna进入受体后会与宿主dna结合,因此需要连接酶连接断口
可通过加入抗凝剂解决凝固问题.但最根本的是,陈旧血中,白细胞会不同程度破裂,其中的DNA会降解掉的,你的提取率会大大下降.
DNAconcentrationismeasuredbyOD260,proteinusuallyisOD280.Someproteinshavepeakabsorbencyaround310nm.Th
小量的DNA提取一般不使用玻璃器皿,除非是硅化过的.因为玻璃很容易带正电,而DNA是携带负电的物质,因此DNA会容易吸附在玻璃表面,造成提取量降低.
除去mRNA是因为:细胞中原有的mRNA会作为合成蛋白质的模板干扰实验结果.除去DNA是因为:细胞中原有的DNA可能作为mRNA合成的模板,而新合成的mRNA也会干扰实验结果.因此,需要除去细胞提取液
加入等体积的酒精是把DNA混合液里面的NaCl浓度调至0.14mol/L,DNA在这个盐浓度下,溶解度是最小的,所以DNA会沉淀下来,另外,酒精可以夺取与DNA分子结合的水分子,从而使DNA沉淀.
通过跑胶看看提取的DNA的长度,有没有很多断裂(跑胶后表现为拖尾严重),以及浓度(条带亮不亮),有没有RNA污染(表现为100bp一下还有一团一团的条带)
你说的那个一般用冷的酒精同样可以达到这种效果,目的是降低DNA的溶解度,使DNA析出
一般操作问题只会影响到浓度高低,如果根本没有,那可能试剂有问题,试剂配置?酸碱度?严格按照要求步骤来一遍.还有一步细节,分层后吸上清液时宁可少吸也不要吸到下层有机溶剂,否则Dna肯定没了
如果是植物DNA的话就表明有酚类物质还有蛋白质,会影响OD值偏小,黄表明有色素
TE缓冲液是弱碱性,对DNA的碱基有保护性,(DNA在它是的稳定性较好,不易破坏其完整性或产生开环及断裂),包括提取好的DNA也要放在TE缓冲液是保存.
变浑浊吧,变成白色沉淀啦.是dna和少量蛋白质析出.
TE缓冲液是弱碱性,对DNA的碱基有保护性,(DNA在它是的稳定性较好,不易破坏其完整性或产生开环及断裂),包括提取好的DNA也要放在TE缓冲液是保存.
1,研磨要充分2,纯化的时候小心点不要吸取杂质以提高纯度详细的可看我们团队的贴吧,里面有专门的贴子,也可以来讨论
按照理论来说,植物的任何一部分都含有DNA,因而提取DNA时可采用植物的任何一部分.但在实验时得考虑到实际操作,提取DNA一般采用植物中较幼嫩的部分,因为这样有利于研磨,从而可以较充分地提取其中的DN
1:低温导致植物组织冻裂,方便研磨使细胞破碎,使DNA释放完全2:低温情况下各酶处于低活性状态,有利于抑制DNAase的作用,保护DNA
应使用体积分数为95%的酒精溶液提取
会,但是会毁坏结构