简并引物有多少对
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/05/16 17:39:46
引物的设计一般要考虑以下几个问题:1.长度,至少要16bp,通常为18-30bp2.解链温度(Tm值)3.避免引物内部或引物之间存在互补序列(3个碱基),从而减少引物二聚体的形成以及引物内部二级结构的
PCR的引物需要软件设计,然后送到生物公司合成,PCR后得到的DNA序列里是包含引物序列的.再问:引物成分是什么
指PCR中仅使用一条引物引发DNA聚合.有点是可以最大限度避免引物二聚体形成.但其应用也有局限性,即模板必须存在反向的两段退火区.
我使用的引物一般稀释到10μM.20微升体系每个引物加0.4微升即可.你的50微升体系加1微升也不算多.你降低下退火温度试一试.
基本不是.当今发展出各色各样的PCR扩增技术,各色各样的高温聚合酶,就是来解决PCR扩增中遇到的扩不出、扩增效率低的问题.如巢式PCR就是扩增那些拷贝数很低的基因片段.有些重复片段的扩增,GC含量高的
最好不要有引物二聚体的产生
因为PCR中,DNA聚合酶不能特异性的起始,需要先形成一段双链DNA来作为复制起始的位点,所以就需要引物(一小段单链DNA)来形成复制起始位点.
引物是一段短的单链RNA或DNA片段,可结合在核酸链上与之互补的区域,其功能是作为核苷酸聚合作用的起始点,核酸聚合酶可由其3′端开始合成新的核酸链.体外人工设计的引物被广泛用于聚合酶链反应、测序和探针
简并引物设计的方法简并引物是指用来编码一段短肽序列的不同碱基序列的混合物.主要用来同源克隆未知的基因,或用来分析某一种基因多态性的一种方法.简并引物设计的常见程序如下:1.利用NCBI搜索不同物种中同
用DNASTAR还不错!或者直接用FRIMER再问:探针设计呢再答:基因探针设计其实和引物设计没什么很大的差别,就是你设计的引物在合成的时候需要进行碱基修饰
一直用primer,还有实验室老板自己写的一个软件,感觉诧异都不大,因为基本的要满足的要素都是一样的,最后也都能拿到蛋白,CODEHOP没用过,感觉万变不离其宗.
我也做得RT-PCR,是提取某物种中未测序的一段基因.是用近缘物种基因进行比对,得到保守序列设计引物,再提取总RNA,RT-PCR得到目的基因的片段再问:我需要检测的分子,在nucleotide里找不
这是由于“DNA聚合酶”和“RNA聚合酶”的性质不同造成的.DNA聚合酶,发挥作用,必须前面有一小段RNA引物;RNA聚合酶,不需要任何引物,可以从零开始合成.DNA合成,需要引物,可以保证DNA复制
我也遇到过类似的问题,根据同源性设的引物来PCR,结果出来的是非特异条带,要不就是没有.还是得优化条件比如引物和模板的比例
PCR产物测序的最大风险是有在凝胶上看起来的一个条带,实际上有多个分子.也就是说长度相似的分子有可能在电泳的时候只有一条带.如果只是进行PCR产物回收,没有进行凝胶分离的过程的话,东西可能更多了.问题
现在一般都是用软件设计引物,也可以用手算.先确定你要扩增的片段起始到终止的长度,引物长度以25个为最佳,最长也可以到40个左右,根据碱基互补配对原则,数出初步设计的引物中的G和C的和,乘以3,T和A的
不用太纠结,有点儿具体也是可以的,一般都能P出来.再问:很多mRNA选择设计不同长度的引物,没有一对是无found显示的,真的很让人纠结;请问文献上的引物有的也是这样吗,不完美,但能扩出来,不会影响q
看你15对引物放几个pcr反应管里边,如果像上边说的1个样本有15次的话,那么10个样本就应该是150次,使用掉试剂盒的4分之1,价格大约200元
以下基于我认为开始的100μM是每一个引物的浓度.你把每条引物稀释10倍到10μM,然后把上下游引物1:1混合在一起,这样上下游引物最终为5μM.PCR的时候10μl的体系里面加入1μl之前混合好的引
不是一回事.随机引物:我们在不知道研究目标任何信息情况下,利用合成好了的任意序列的引物(可以买得到),可能扩增出来的产物条带数目不定;随机引物可能会在全基因组范围内有结合位点.通用引物:一般是指某基因