正向引物和反向引物与RNA
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/05/15 18:37:33
正反向引物就是一个引物是从3端开始,另一个是从5端开始的.看分子生物学的书吧,里面有详细介绍DNA复制的啊,就是那些理论而已.解释的太简单了,我做过pcr扩增的实验,不懂得可以问我,我尽量回答.
不可以.因为RNA极易降解,很难储存的.PCR的引物是DNA,是化学合成的,如果换成RNA的话,很快就降解了,根本没法用.反转录PCR也是DNA为引物.PCR反应是人工控制的.但在生物体内,自然条件下
首先要看目的基因中是否含有该酶切位点,只有没有的才可以选.其次,如果需要做表达,需要考虑起始密码子,防止移码突变;第三要考虑标签用于后面的蛋白纯化.如果仅仅用来拿到目的基因,那只需要第一点即可再问:我
可以这样来说吧,首先你应该有一条已知的序列,反向引物设计时在序列的5'方向找一段序列然后反向互补作为反向引物,在3'方向直接找一段序列作为正向引物.这样就OK了,这是引物的设计,至于其他条件可以参考相
DNA的合成必须3-OH,也就是说核苷酸必须要连接在3-OH上才能够合成延伸RNA引物就是提供3-OH的作用.而RNA的合成不需3-OH,所以引物用RNA比较好.事实上,只要是能提供3-OH的核苷酸,
跟你模版对比就可以了!延伸方向都是5‘--3’.
正向引物和反向引物是相对的通常以一个双链DNA(上面的那条链)的上游结合部位称为正向引物是从左到右的方向,也就是5-3的方向而下面那条互补链的下游结合部位称为反向引物其方向是从右到左的因为下面的链的方
酶切位点多数时候是反向回文结构,因此你看到的正向序列与反向互补序列是相同的,所以在两个方向的引物上看,酶切位点序列完全一样.
一定要的.正向引物:5'.CTTCGAAATTC3'反向引物:5'.CCGATCGGGAGA3'回答楼主的补充问题:设计正向引物时,该引物序列应该具有和你待扩增DNA序列接近5‘段处的序列.反向引物设
它的作用似乎只是分开两条DNA链,暴露出某些特定序列以便引发体与之结合,在前导链模板DNA上开始合成RNA引物,这个过程称为转录激活(transcriptionalactivation),在前导链的复
DNA或RNA都行.在体内DNA复制的时候引物为RNA.
DNA复制起始阶段DNA聚合酶需要借助RNA引物后的3‘-OH来将dNTP连接到先导链上,然后激活复制.而PCR只是一种单纯的扩增技术,DNA和RNA均满足条件.
RNA在外界容易降解,所以在体外用DNA.这样比较容易操作.
为什么需要有RNA引物来引发DNA复制呢?这可能尽量减少DNA复制起始处的突变有关.DNA复制开始处的几个核苷酸最容易出现差错,因此,用RNA引物即使出现差错最后也要被DNA聚合酶Ⅰ切除,提高了DNA
一般使用primer5就挺好,不知道你是扩基因还是启动子,基因是否是已知.PCR引物设计原理:PCR引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段,使其能有效地扩增模板DNA序列.因此,引物的优劣直接关
pcr与引物的关系,pcr需要引物啊,其实引物就是扩增的目的片段两端的碱基互补序列.
引物是一个RNA片段,叫RNAprimer.然后以它为起点开始复制.
这可能尽量减少DNA复制起始处的突变有关.DNA复制开始处的几个核苷酸最容易出现差错,因此,用RNA引物即使出现差错最后也要被DNA聚合酶Ⅰ切除,提高了DNA复制的准确性.
我不了解你的实际情况,我给你几条建议:1.可能是内参引物有问题2.你扩增内参基因的PCR条件设计可能有问题,如Tm3.你用的是一块胶吗?加核酸染料了吗?
DNA聚合酶工作时必须要有一个引物,它只能把新的核苷酸加到已经存在的核酸的3'-羟基上,RNA引物就提供这个羟基.